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[交流] 【纯干货】So easy!碱性化合物的分离

在反相液相色谱分析中,碱性化合物的分析是一个难题,大家可能经常会碰到类似峰形拖尾,峰宽,检测限和灵敏度差,肩峰等问题。这其中最主要的问题就是峰形拖尾。如何选择合适的色谱柱和色谱条件来分析碱性化合物呢?

碱性化合物峰形拖尾的原因

c18柱是在分析碱性物质中最常用的固定相。由于十八烷基碳链很长,在键合的时候空间位阻会很大,导致键合率不高,容易残留有大量未键合的硅羟基。在很多流动相条件下,这些游离的硅羟基容易电离,与碱性化合物电离出来的阳离子产生二级作用,导致目标化合物不能非常顺利的洗脱,从而产生拖尾。

色谱柱的选择

首先选择金属残留极低的高纯硅胶。金属残留较多的话会降低c18链的键合率,使得游离的硅羟基增加;此外,金属离子的存在,会增加硅羟基的电离。

为了减小硅羟基的电离,目前最常见的做法是用小分子基团(如tms)对固定相上残留的硅羟基进行端基封尾处理。每个厂家端基封尾的工艺会有所差别,如何判断一根色谱柱端基封尾处理的好坏呢?细心的朋友可能会发现,在各厂家反相色谱柱的出厂检测报告中基本都会有一个碱性物质的代表(通常是尿嘧啶)。大家可以通过柱报告上碱性化合物的峰形对称性和灵敏度来做一个大致的判断。简单来说,柱报告上碱性化合物的峰形越对称,灵敏度越高的,往往端基封尾做的越好,色谱柱惰性越好,越适合分析碱性化合物。

除了对残留的硅羟基进行端基封尾之外,有的色谱柱厂家会在键合固定相之前对硅胶颗粒进行碱性去活处理,此外,还有在c18链的两侧再键合异丁基的侧链。总的来说,这些做法最主要的目的就是为了减少碱性化合物与游离硅羟基之间的二级作用,改善碱性化合物的峰形和灵敏度。

流动相的选择
关于流动相的选择首先会考虑调整流动相ph值。我们最通常的做法是选择高ph值的碱性条件,能减少目标化合物的电离,这种方法能很好的改善碱性化合物的峰形和保留,但是同时高ph值碱性条件容易对色谱柱造成损伤,影响色谱柱的使用寿命。研究发现,在低ph值条件下,硅羟基的电离会明显的减少。尤其是在ph值<2.5的条件下,游离硅羟基的电离率不足10%,很大程度上避免了游离硅羟基和碱性化合物之间的二级作用。因此,对于碱性化合物的分析,流动相条件选择在低ph值条件下进行更佳。

除了调整流动相ph值之外,还可以添加扫尾剂以减少碱性化合物的拖尾。通常是流动相在酸性条件下加入少量三乙胺或二乙胺。酸性条件下,流动相中的三乙胺或二乙胺电离出的阳离子与游离的硅羟基结合,这样也就避免了碱性化合物与游离硅羟基的二级作用。

另外,流动相中添加足够高浓度的缓冲盐也能起到改善碱性化合物峰形的作用。缓冲盐中的金属离子“包裹”住游离的硅羟基,且呈正电状态,就能有效的阻断碱性化合物与游离硅羟基的二级反应。

以上各种方法都能在一定程度上改善碱性化合物的分离,大家可以根据实际样品的情况来选择合适的色谱柱和固定相。最后,还有一点,如果是极性偏大的碱性化合物,大家也可以考虑采用离子对色谱或者离子交换色谱这样的方式来做。

[ Last edited by nono2009 on 2021-5-8 at 22:10 ]
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南方o

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daisyzhangwei(金币+1): 谢谢参与
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26楼2021-03-07 18:14:16
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疯了个子

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daisyzhangwei(金币+1): 谢谢参与
6楼2020-09-17 09:49:12
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myy1787

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daisyzhangwei(金币+1): 谢谢参与
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7楼: Originally posted by daisyzhangwei at 2020-09-18 08:47:28

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8楼2020-09-19 08:46:44
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8楼: Originally posted by myy1787 at 2020-09-19 08:46:44
对实际操作很有意义!学习啦
...

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10楼2020-09-22 11:14:58
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6楼: Originally posted by 疯了个子 at 2020-09-17 09:49:12
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11楼2020-09-22 11:15:33
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dxlXJSTU

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daisyzhangwei(金币+1): 谢谢参与
三乙胺是加到乙腈或者甲醇里面吗?那酸性条件是通过在水里面加酸控制的吗?

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30楼2022-05-25 11:10:56
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30楼: Originally posted by dxlXJSTU at 2022-05-25 11:10:56
三乙胺是加到乙腈或者甲醇里面吗?那酸性条件是通过在水里面加酸控制的吗?

一般调ph值都是加水相里面,有机酸碱盐(甲酸,乙酸,三乙胺等)有机相也可以加
31楼2022-08-15 16:39:34
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tzynew2楼
2020-09-16 11:32   回复  
daisyzhangwei(金币+1): 谢谢参与
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syhorchid5楼
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nono200928楼
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BiotageAB29楼
2021-05-08 23:06   回复  
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