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抽象派单纯

新虫 (初入文坛)

[交流] 有什么办法和酶可以防止dUTP扩增,而仅扩增dNTP已有3人参与

最近想做一个筛选。

想问下大家,有没有什么办法或者酶可以比较高特异性的识别T碱基和U碱基, 当体系中原料是dNTP时可以正常扩增,而换成dUTP时则无法扩增,当然,反过来也可以,谢谢!
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pennchem

金虫 (正式写手)


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加入 UNG酶就可以了, 根据你反应温度,加入耐热或不耐热的酶
行至水穷处,坐看云起时
2楼2020-09-14 08:05:25
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山舞银蛇

铁杆木虫 (正式写手)


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引用回帖:
2楼: originally posted by pennchem at 2020-09-14 08:05:25
加入 ung酶就可以了, 根据你反应温度,加入耐热或不耐热的酶

我估计你理解错题主的意思了。他应该不是想消化掉模板里的dutp。其实这问题很简单,使用pfu这类酶,是不能把溶液中的dutp掺入产物的。
核酸提取&PCR试剂开发
3楼2020-09-14 10:14:50
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抽象派单纯

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 山舞银蛇 at 2020-09-14 10:14:50
我估计你理解错题主的意思了。他应该不是想消化掉模板里的dutp。其实这问题很简单,使用pfu这类酶,是不能把溶液中的dutp掺入产物的。...

请问PFU酶可以放到扩增体系里吗? 比如我做普通的PCR或者恒温扩增,如果放入pfu酶,是不是就无法扩增dUTP为原料的体系? 如果是正常的dNTP体系就仍然可以扩增?
4楼2020-09-14 12:44:57
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junjieshao

铜虫 (小有名气)


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高保真酶的弱点在于有校验活力而导致产量偏低——扩增同样的次数可是产物少,正所谓慢工出细活儿。真正背后的原因还有在PCR过程中由于dCTP脱氨基生成dUTP,dUTP的累积会造成所谓"PCR poisoning",抑制PCR反应,也阻碍Pfu的校正功能,从而某种程度上限制了酶的精确度和延伸模版的能力。PfuUltra特别添加ArchaeMaxx™聚合酶增强因子,能将dUTP分解为无毒的dUMP和焦磷酸,从而解除dUTP累积造成的影响——不要小看这一点改进,它可以显著提高产量、减少扩增时间并可扩增更长的模板。
5楼2020-09-16 05:17:38
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山舞银蛇

铁杆木虫 (正式写手)


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引用回帖:
4楼: Originally posted by 抽象派单纯 at 2020-09-14 12:44:57
请问PFU酶可以放到扩增体系里吗? 比如我做普通的PCR或者恒温扩增,如果放入pfu酶,是不是就无法扩增dUTP为原料的体系? 如果是正常的dNTP体系就仍然可以扩增?...

你用Taq、Tth、Pfu、KOD这些酶做出来的才叫PCR,

既然用pfu,又怎么会能做恒温扩增呢
核酸提取&PCR试剂开发
6楼2020-09-17 08:52:00
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