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酶促重组等温扩增（ERA）技术简介
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酶促重组等温扩增技术（ERA技术）是苏州先达基因公司研发团队研发的具有全球自主知识产权等温核酸扩增技术，它利用抗体制药领域先进的Molecular Design、Directed Evolution、Affinity Maturation 等技术手段，将来源于细菌，病毒和噬菌体的特定工具酶进行改造突变并筛选其功能，通过不同的核酸扩增反应体系进行优化组合，从而获得核心的重组等温扩增体系，即（Enzymatic Recombinase Amplification）ERA技术方法,并将方法申请了国家专利和国际专利（申请号：201910262085.3；PCT201910262085.3）。该方法低温条件下（25-42℃）可对痕量的靶DNA片段进行特异性的扩增，在最适温度37-42℃时，扩增反应时间仅需15分钟，其低温适应性和灵敏度等方面取得了重大突破并达到国际先进水平，而且摆脱国外专利壁垒。 ERA技术在核酸检测领域开发了三大核心技术，体温扩增技术，能在恒温条件下，将痕量的核酸模板扩增到可以检出的水平；单分子荧光检测技术(SM@RT)，集恒温扩增与荧光信号检测于一体，可实现扩增过程的实时检测；核酸快速释放技术，为实验节省更多的时间。 原理介绍 其反应体系类似于 RPA ， 它通过模拟生物体遗传物质自身扩增复制的原理，通过基因工程对 重组酶 、 外切酶 、 聚合酶等多酶体系进行改造，建立特殊扩增反应体系，在37-42℃恒温条件下，可将微量DNA/RNA的特异性区段在数分钟内扩增数十亿倍。 1、在常温的环境下，重组酶可与引物DNA紧密结合，形成酶和引物的聚合体 2、当引物在模板DNA上搜索到与之完全匹配的互补序列时， 在单链DNA结合蛋白的帮助下，打开模板 DNA的双链结构 3、在DNA聚合酶的作用下，形成新的DNA互补链，并完成扩增产物的指数级增长 应用领域 1、研究诊断领域： 针对细胞培养中的支原体污染，提供一种快速、简单、灵敏的检测方法，只需要20分钟便能得出结果 2、公共卫生领域： 针对危害公众健康的呼吸道传染性病原，肠道致病病原及生殖系统病原进行快速检测 3、食品安全领域： 针对致病微生物、动物源性成分和转基因农产品进行快速现场检测 4、农业生产领域： 针对水产、畜牧养殖和宠物中各类病原，进行早期快速检测和诊断 ERA技术有哪些优势 常规PCR必须经过变性、退火、延伸三个步骤，而PCR仪本质上就是一个控制温度升降的设备。ERA反应的最适温度在37℃-42℃之间，无需变性，在常温下即可进行。这无疑能大大加快PCR的速度。此外，由于不需要温控设备，ERA可以真正实现便携式的快速核酸检测。 据介绍，ERA检测的灵敏度很高，能够将痕量的核酸（尤其是DNA）模板扩增到可以检出的水平，从单个模板分子得到大约1012扩增产物。而且ERA还用不着复杂的样品处理，适用于无法提取核酸的实地检测。 ERA既可以扩增DNA也可以扩增RNA，还省去了额外的cDNA合成步骤。你不仅可以对扩增产物进行终点检测，还可以对扩增过程进行实时监控，甚至可以通过试纸条（侧流层析试纸条LFD）读取结果。 |
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