应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜     石溪大学接受考研调剂申请>

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » QPCR的问题
【调剂】北京石油化工学院2024年16个专业接受调剂
71/1返回列表
查看: 1546  |  回复: 6
只看楼主@他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
【悬赏金币】回答本帖问题，作者My-life将赠送您 20 个金币

My-life

捐助贵宾 (小有名气)

[求助] QPCR的问题已有1人参与

在做QPCR（sybr green）时一直没有扩增曲线（就是一条直线），图为溶解曲线的图和程序参数。
扩增片段为cgc att cag gat tgc atg att gcc tcg tct taa cgg tct caa ctc gta（此片段为设计合成）
上下游引物为ttc agg att gca tga ttg cc和acg agt tga gac cgt taa gac g
20μL体积，1μL模板（10μM），1μL（10μM）上游引物和1μL（10μM）下游引物，10μL supermix液，8μL的纯水。
所以在此向大神们请教几个问题：1，单链模板可以直接PCR？
2，试剂盒supermix影响大？
3，影响QPCR的关键点是啥？
小白一枚，之前一直从事酶联免疫的分析检测，未涉及PCR实验，初接触，无处下手了！！！

QPCR的问题
305889642721921794.jpg


QPCR的问题-1
790287839903650680.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
1楼2020-07-11 21:06:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

魔里纱

新虫 (初入文坛)
可能是没有设采集信号吧...

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
2楼2020-07-11 21:55:57
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

owl2010

金虫 (正式写手)
没搞清楚你的模板是什么？如果模板是单链是不能扩增出片段的。做qPCR之前可以做常规PCR检测一下是不是能扩增出条带。没有条带说明引物不行或者模板不行。
赞一下 回复此楼
男人的组成要素:金钱、面子、性、怕死、自恋、吹牛逼。
3楼2020-07-14 13:26:56
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

匿名

用户注销 (小有名气)
本帖仅楼主可见
赞一下
4楼2020-07-14 14:58:18
 已阅   申请MolEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页

My-life

捐助贵宾 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by owl2010 at 2020-07-14 13:26:56
没搞清楚你的模板是什么？如果模板是单链是不能扩增出片段的。做qPCR之前可以做常规PCR检测一下是不是能扩增出条带。没有条带说明引物不行或者模板不行。

任何单链都无法扩增？
赞一下 回复此楼
5楼2020-07-20 15:03:29
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

A奇点

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by owl2010 at 2020-07-14 13:26:56
没搞清楚你的模板是什么？如果模板是单链是不能扩增出片段的。做qPCR之前可以做常规PCR检测一下是不是能扩增出条带。没有条带说明引物不行或者模板不行。

如何做常规PCR啊？我的qPCR做出来，内参基因和目的基因的ct值都在31左右，太痛苦了

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
6楼2020-07-21 23:00:25
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

duanbiao127

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

单链可以扩增，cDNA都是单链，是可以扩增的，不要听楼上的乱说。（关注生物技术控公众号，有问题可留言）
赞一下 回复此楼
7楼2020-08-12 10:57:28
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 My-life 的主题更新
71/1返回列表
不应助 确定回帖应助 (注意：应助才可能被奖励，但不允许灌水，必须填写15个字符以上)
普通表情 龙 兔 虎 猫 论文翻译-EnPapers美助理教授团队-SCI英文润色
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 前同事拿我以前未中的国自然标书申请今年的国自然，现在基金委发来调查函 +33 bjdxyxy 2024-04-19 53/2650 2024-04-25 08:05 by 大雁高飞
[论文投稿] Chemical Engineering Journal投稿3周了，一直显示With editor状态。这是送审了吗？ 10+4 yifeng11 2024-04-20 10/500 2024-04-25 02:14 by yifeng11
[硕博家园] 博士白读了 +36 Da_Meng_Zi 2024-04-21 40/2000 2024-04-24 21:54 by hyjtb
[访问学者] CSC的访问学者申请，没有个评审意见，也不知道怎么改，还有必要申请吗 +4 flyingship 2024-04-20 4/200 2024-04-24 21:09 by 59038mute
[找工作] 普通院校药学硕士，做合成的，感觉找不到工作 +5 pom戴墨镜 2024-04-24 9/450 2024-04-24 20:19 by l419110028
[考博] 24年 申博 化学/材料 一作6篇sci +9 wangyp123 2024-04-23 11/550 2024-04-24 19:01 by bangbangbiu
[考博] 真的好想读博！ +10 wangzhe_bs 2024-04-22 13/650 2024-04-24 18:32 by 鱼翔浅底1
[考博] 求博导 +4 好okjh 2024-04-21 5/250 2024-04-24 18:18 by zxl_1105
[教师之家] 刚博士毕业，入职普通一本高校 +17 保持肌肤 2024-04-20 18/900 2024-04-24 16:01 by 款款飞
[基金申请] 化学结清有情发出来了 +3 starboy7286 2024-04-20 3/150 2024-04-24 15:52 by 嘿，黑贝
[基金申请] 颜宁:基础研究应顶天立地,立地即从需求端作为问题的出发点,立项背景就是面向真实需求 +11 zju2000 2024-04-18 11/550 2024-04-24 14:55 by 1501311
[论文投稿] 期刊推荐 20+4 木颜尘ip 2024-04-22 7/350 2024-04-24 10:06 by bobvan
[公派出国] 東京大学 应用化学专业柳田研究室 招收修士/博士生 +5 蝶梦123 2024-04-19 5/250 2024-04-23 22:40 by 90472jvvh
[论文投稿] 无under review，直接DIP，咋么办。 +10 lizhengke06 2024-04-19 16/800 2024-04-23 19:15 by 化学程序员
[考博] 重庆大学计算机学院2024博士招生 +4 y_y_y_yyy 2024-04-18 6/300 2024-04-23 16:31 by 让一切随风l
[教师之家] 发现督导在听课，需要跟TA招呼示意吗？有同学看手机、课件有疏漏算大问题吗？ +11 河西夜郎 2024-04-19 11/550 2024-04-23 15:01 by mylifecg
[论文投稿] 催稿后秒拒 +9 lizhengke06 2024-04-19 11/550 2024-04-21 22:29 by ggjjyyy
[硕博家园] 材料工程，二本硕士，值得读吗 +3 简风23 2024-04-20 6/300 2024-04-21 12:19 by 简风23
[基金申请] 估计今年青基又没戏 +11 忆念7 2024-04-18 11/550 2024-04-20 17:29 by mygod_nju
[论文投稿] SCI 评审意见回复 模板 15+3 Kilig0317 2024-04-18 4/200 2024-04-19 08:46 by bobvan
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭