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【调剂】北京石油化工学院2024年16个专业接受调剂
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songyunhong

铜虫 (小有名气)

[求助] 长引物PCR已有2人参与

想利用长引物来引入一段序列,结果构建出来的载体中,长引物引入的序列发生了部分缺失或突变,为什么呢?

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pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
(1)引物合成太长,容易出现错误,合成过程中引物序列不对

(2)如果引物合成没有问题,扩增过程中出现问题(用高保真酶可以解决)

(3)如果扩增也没问题,转化后在细菌内出现重组之类,导致序列发生改变

(4)序列没有错误,测序离引物太近,测序出现问题
行至水穷处,坐看云起时
2楼2020-07-07 08:13:04
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匿名

用户注销 (小有名气)


本帖仅楼主可见
3楼2020-07-07 16:07:45
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GRUBBY_WU

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
如果是pcr插入序列,长度不能太长,一次10bp左右差不多,太长要分几次

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2019更好更棒!
4楼2020-07-08 17:50:11
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强仔123

新虫 (小有名气)

长序列合成的方式注意一下

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5楼2020-08-03 23:52:54
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司静Jing.

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by pennchem at 2020-07-07 08:13:04
(1)引物合成太长,容易出现错误,合成过程中引物序列不对

(2)如果引物合成没有问题,扩增过程中出现问题(用高保真酶可以解决)

(3)如果扩增也没问题,转化后在细菌内出现重组之类,导致序列发生改变
...

老师思考回答问题太全面到位有条理了 敬佩~
6楼2022-08-01 15:18:50
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766482434

禁言 (初入文坛)

★ ★ ★ ★ ★
kk1424: 金币-5, 屏蔽内容, 违规存档, 违规 2022-08-29 10:57:09
本帖内容被屏蔽

7楼2022-08-22 14:56:12
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