【调剂】北京石油化工学院2024年16个专业接受调剂
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小迷糊haha

新虫 (初入文坛)

[交流] 感受态制备已有3人参与

现有M15菌株,想制备成感受态来表达蛋白。请教有人做过感受态吗?能否传授经验,小白一枚。请教各位了

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2nd lab

新虫 (小有名气)


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我们有现成的M15感受态细胞,18516107502,联系我

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5楼2020-05-28 12:41:24
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biosci

捐助贵宾 (职业作家)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
加卡那霉素,这个菌天然抗卡那,其他就没撒特殊的,跟普通大肠杆菌一样

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2楼2020-05-27 11:11:40
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小迷糊haha

新虫 (初入文坛)

谢谢,我用氯化钙方法做过一次。但是没有在含卡那和氨苄的固体培养基上长。长的几个经过菌落pcr没出现条带。不知道是哪些步骤最可能出现问题

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3楼2020-05-27 15:08:33
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soarshining

捐助贵宾 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
不太明白,你是感受态转完然后都是假阳性克隆的意思吗?还是说你没有加抗生素?如果是前者,我最近也遇到了这个问题,测序公司回复我说排除载体本身的问题,就是污染了。把所有能换的都换掉,枪头、培养基、琼脂平板、涂布棒、台子里剩余的空皿等等,有的可以考虑长时间紫外照射后继续用。然后台子用酒精全面擦拭过后开紫外照足够的时间。再重复一次~

另外,务必保证你的感受态本身在抗性平板长不起来,否则就没有意义。
4楼2020-05-27 22:17:56
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