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【调剂】北京石油化工学院2024年16个专业接受调剂
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小迷糊haha

新虫 (初入文坛)

[交流] 感受态制备已有3人参与

现有M15菌株，想制备成感受态来表达蛋白。请教有人做过感受态吗？能否传授经验，小白一枚。请教各位了

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1楼2020-05-27 09:54:02
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biosci

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加卡那霉素，这个菌天然抗卡那，其他就没撒特殊的，跟普通大肠杆菌一样

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2楼2020-05-27 11:11:40
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小迷糊haha

新虫 (初入文坛)
谢谢，我用氯化钙方法做过一次。但是没有在含卡那和氨苄的固体培养基上长。长的几个经过菌落pcr没出现条带。不知道是哪些步骤最可能出现问题

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3楼2020-05-27 15:08:33
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soarshining

捐助贵宾 (著名写手)
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不太明白，你是感受态转完然后都是假阳性克隆的意思吗？还是说你没有加抗生素？如果是前者，我最近也遇到了这个问题，测序公司回复我说排除载体本身的问题，就是污染了。把所有能换的都换掉，枪头、培养基、琼脂平板、涂布棒、台子里剩余的空皿等等，有的可以考虑长时间紫外照射后继续用。然后台子用酒精全面擦拭过后开紫外照足够的时间。再重复一次~

另外，务必保证你的感受态本身在抗性平板长不起来，否则就没有意义。
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4楼2020-05-27 22:17:56
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2nd lab

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我们有现成的M15感受态细胞，18516107502，联系我

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5楼2020-05-28 12:41:24
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小迷糊haha

新虫 (初入文坛)
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4楼: Originally posted by soarshining at 2020-05-27 22:17:56
不太明白，你是感受态转完然后都是假阳性克隆的意思吗？还是说你没有加抗生素？如果是前者，我最近也遇到了这个问题，测序公司回复我说排除载体本身的问题，就是污染了。把所有能换的都换掉，枪头、培养基、琼脂平板 ...

感受态是kana抗性，载体是amp抗性。转化产物在只含kana板子上不长，但是在含有amp+kana的板子上有零星单菌落。这种可能是不是就是感受态不行，没法长。长的单菌落就是杂菌呢？

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6楼2020-06-02 16:25:21
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小迷糊haha

新虫 (初入文坛)
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5楼: Originally posted by 2nd lab at 2020-05-28 12:41:24
我们有现成的M15感受态细胞，18516107502，联系我

好的好的，微信加你请教一下。

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7楼2020-06-02 16:34:11
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小迷糊haha

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 2nd lab at 2020-05-28 12:41:24
我们有现成的M15感受态细胞，18516107502，联系我

好的好的，微信加你请教一下。

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8楼2020-06-02 16:34:28
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