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小迷糊haha

新虫 (初入文坛)

[交流] 感受态制备已有3人参与

现有M15菌株,想制备成感受态来表达蛋白。请教有人做过感受态吗?能否传授经验,小白一枚。请教各位了

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biosci

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加卡那霉素,这个菌天然抗卡那,其他就没撒特殊的,跟普通大肠杆菌一样

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2楼2020-05-27 11:11:40
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小迷糊haha

新虫 (初入文坛)

谢谢,我用氯化钙方法做过一次。但是没有在含卡那和氨苄的固体培养基上长。长的几个经过菌落pcr没出现条带。不知道是哪些步骤最可能出现问题

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3楼2020-05-27 15:08:33
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soarshining

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不太明白,你是感受态转完然后都是假阳性克隆的意思吗?还是说你没有加抗生素?如果是前者,我最近也遇到了这个问题,测序公司回复我说排除载体本身的问题,就是污染了。把所有能换的都换掉,枪头、培养基、琼脂平板、涂布棒、台子里剩余的空皿等等,有的可以考虑长时间紫外照射后继续用。然后台子用酒精全面擦拭过后开紫外照足够的时间。再重复一次~

另外,务必保证你的感受态本身在抗性平板长不起来,否则就没有意义。
4楼2020-05-27 22:17:56
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2nd lab

新虫 (小有名气)


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我们有现成的M15感受态细胞,18516107502,联系我

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5楼2020-05-28 12:41:24
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小迷糊haha

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by soarshining at 2020-05-27 22:17:56
不太明白,你是感受态转完然后都是假阳性克隆的意思吗?还是说你没有加抗生素?如果是前者,我最近也遇到了这个问题,测序公司回复我说排除载体本身的问题,就是污染了。把所有能换的都换掉,枪头、培养基、琼脂平板 ...

感受态是kana抗性,载体是amp抗性。转化产物在只含kana板子上不长,但是在含有amp+kana的板子上有零星单菌落。这种可能是不是就是感受态不行,没法长。长的单菌落就是杂菌呢?

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6楼2020-06-02 16:25:21
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小迷糊haha

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 2nd lab at 2020-05-28 12:41:24
我们有现成的M15感受态细胞,18516107502,联系我

好的好的,微信加你请教一下。

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7楼2020-06-02 16:34:11
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小迷糊haha

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 2nd lab at 2020-05-28 12:41:24
我们有现成的M15感受态细胞,18516107502,联系我

好的好的,微信加你请教一下。

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8楼2020-06-02 16:34:28
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