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利用凝胶过滤层析纯化蛋白质的纯化过程已有1人参与
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利用Union 蛋白纯化仪 UEV 25D进行蛋白的纯化 柱子的准备 装柱的效率决定了在洗脱过程中产生狭缝对称峰的能力。在凝胶过滤中，分离过程只有一个柱体积的缓冲液流过柱子，所以柱效尤其重要。装柱柱床和颗粒的均一性影响流过柱子的一致性，因此影响峰形和最终的峰宽。 在开始分离前，应将缓冲液和柱子维持在相同的温度。温度的快速交换会引起装柱中的气泡产生，影响分离。在分离之前需使用1到2个柱体积的缓冲液平衡柱子。 样品进样 样品进样方法极大取决于进样体积和进样使用的设备，可以通过色谱系统、蠕动泵或注射器直接上柱。 洗脱 使用单缓冲液系统，样品从凝胶过滤柱中同溶剂洗脱。进样后，在一个柱体积的缓冲液流过柱子后，全部分离完成。为了获得良好的分离效果，应使用适当的流速，确保有足够的时间允许分子进入或流出柱子。低流速有助于获得更好的分辨率。 如果在低流速时峰形分离良好，也可以增加流速或者缩短柱子以节省时间。 在每次运行分离的最后都需要一个洗涤步骤，以便于移除残留在柱子上的分子，防止交叉污染，为下一次分离做准备。 附图二中列举了一些峰形出现的可能原因（来源于GE） 柱子的清洗 1. 使用一个柱体积的0.5 M NaOH进行清洗，以去除绝大多数非特异吸附的蛋白质； 2. 用一个柱体积的蒸馏水进行清洗， 3. 用两个柱体积的缓冲液进行再平衡，或直到A280监控的基线和洗脱剂的pH稳定。 当污染物较为严重时： 1. 使用四个柱体积的 1M NaoH进行清洗（以去除疏水蛋白或脂蛋白），接着使用四个柱体积的蒸馏水进行清洗； 2. 使用0.5个柱体积的30%异丙醇进行清洗（为了去除脂类和非常疏水的蛋白质），接着使用两个柱体积的蒸馏水进行清洗； 3. 使用至少五个柱体积的缓冲液平衡柱子，或直到开始新的分离前，A280的监控基线和洗脱液的pH稳定。 纯化过程结束不再使用后，需用20%乙醇将整个纯化系统充满。  蛋白纯化仪.jpg  一些峰形出现的可能原因.png |
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