【调剂】北京石油化工学院2024年16个专业接受调剂
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xiaoxia110

木虫 (正式写手)

[求助] Taqman探针法,阴性的末端起峰问题已有1人参与

现在用Taqman探针法,配制了一组检测混合液,发现阴性孔的末端的峰形往上翘,是用ABI7500做的实验,并且将纵坐标放大后的图1所示:

图1中的红色和蓝色均是阴性对照出峰的结果,不同次实验,上翘的程度不一样,探针标记物用第三通道和第四通道都试验过,结果一样无改善。

后来更换引物的批次后,有不起峰的结果,如图2 蓝色线条所示,图2 红色线条是其他批次的,略有起峰的。

现在初步觉得可能与引物的质量或什么有关系,但又无法确定原因具体在哪里。希望各大神给点意见。

Taqman探针法,阴性的末端起峰问题
Image 089.jpg


Taqman探针法,阴性的末端起峰问题-1
Image 090.jpg
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cqzhangzhang

铁杆木虫 (著名写手)

典型的s型曲线,应该是mix被污染了吧。这句话是什么意思没看懂。

发自小木虫Android客户端
2楼2020-02-14 20:30:46
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cqzhangzhang

铁杆木虫 (著名写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cqzhangzhang at 2020-02-14 13:30:46
典型的s型曲线,应该是mix被污染了吧。这句话是什么意思没看懂。

探针标记物用第三通道和第四通道都试验过,结果一样无改善。

发自小木虫Android客户端
3楼2020-02-14 20:30:55
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chenkai1222

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

NTC对照翘尾问题在TaqMan PCR实验中比较常见,而且非常难以解决,这种问题我也遇到过。如果你的引物探针设计的没问题的话,大概率是酶和buffer导致的,建议你多试几个taq酶品牌,另外可以购买单组分的PCRbuffer,自己调整dNTP、Mg等浓度。
4楼2020-04-02 17:06:28
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wjie999

新虫 (初入文坛)

5楼2020-04-15 00:09:34
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