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【调剂】北京石油化工学院2024年16个专业接受调剂
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shikicat

新虫 (初入文坛)

[求助] 想问下淀粉模拟体外消化的问题已有2人参与

就是通过这个实验来测血糖生成指数,GOPOD法和DNS法都尝试过,最后的结果始终不对;

  我采用的是GOPOD法来测淀粉水解率,测试样品是红薯粉丝,虽然吸光度值随着时间推移在上升,但是计算结果仍然很低,关于这点,我真的百思不得其解。
     粉丝样品,测出来的淀粉是74.5g/100g,因为实验只用了0.1ml样品液,按照浓度100mg/50ml来计算,每0.1ml样品液含淀粉149微克,但是按照GOPOD法算出来的葡萄糖含量只有1~19微克左右,换算成水解率最多只有13%,用碘检测上清液,又不呈蓝色,还请各位大佬看看,究竟问题出在哪里??
     万分感谢!!                                                                                                                 
                                                                                                                                      
方法如下:
A.  试剂配制:

混合酶液:称量1.16g的猪胰α-淀粉酶和0.03g的糖化酶于烧杯中加水溶解,转移至200ml容量瓶中用蒸馏水定容;

乙酸-乙酸钠缓冲液:称取1.64g乙酸钠溶于水中,加入100ml容量瓶用蒸馏水定容,并调pH至5.2。

无水乙醇,葡萄糖氧化酶试剂盒;

B. 步骤:

1、称取100mg样品置于50mL离心管中(再做两个平行)

2、加入2mL水,沸水浴 10min糊化

3、添加13mL pH5.2的0.2mol/L的乙酸-乙酸钠缓冲液,在37°C恒温水浴下平衡10min;

4、再加0.2mL混合酶液(猪胰α-淀粉酶 290U/mL,糖化酶15U/mL),在37°C恒温水浴下振荡(转速为150r/min)并准确计时。

5、振荡反应0min,30min,60min,90min,120min,180min后分别取 0.1mL 上清液加入至2mL无水乙醇进行灭酶处理,

6、用GOPOD葡萄糖试剂盒在510nm处比色测定葡萄糖含量,每个样品平行测定3次取平均值,绘制淀粉水解曲线。

7、将3ml GOPOD的试剂加入0.1ml的样品溶液混合,并在40-50℃孵化20Min。在510nm波长下读取数值(和试剂空白作对比)

来源:南昌大学硕士研究生学位论文

《不同添加物对挤压重组米血糖生成指数及性质的影响》
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15t_vivi

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

我最近也在做这个,之前一直做出来实验效果不好,问了师兄才知道,混合酶液应该是用缓冲液配制
8楼2021-10-09 10:16:56
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普通回帖

shikicat

新虫 (初入文坛)

有没有大佬走过路过看看啊?
2楼2019-11-26 16:34:10
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怪兽爱萝莉

新虫 (初入文坛)

体外实验模拟血糖上升指数,肯定不准的,别想了。
3楼2020-03-20 13:50:09
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Seminario

新虫 (初入文坛)

4楼2020-08-31 21:24:39
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Seminario

新虫 (初入文坛)

1.红薯粉是不是糊化过的样品。那么是不是就不需要再糊化了。2.可以做一个单因素实验,看一下酶的用量,胰a-淀粉酶和糖化酶的比例,以及pH值对最后结果的影响。

发自小木虫Android客户端
5楼2020-08-31 21:28:51
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清风不沾水

新虫 (初入文坛)

6楼2021-06-07 22:35:55
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wyxx0920

新虫 (小有名气)

为什么猪胰α-淀粉酶称取1.16 g,这个怎么计算了?

发自小木虫Android客户端
7楼2021-07-12 13:38:22
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bodea

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
8楼: Originally posted by 15t_vivi at 2021-10-09 10:16:56
我最近也在做这个,之前一直做出来实验效果不好,问了师兄才知道,混合酶液应该是用缓冲液配制

我用缓冲液配了酶液也还是很低,请问还有别的要注意的地方嘛::

发自小木虫Android客户端
9楼2022-01-12 16:24:22
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是姜姜姜!

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by shikicat at 2019-11-26 16:34:10
有没有大佬走过路过看看啊?

您好,最近做的淀粉消化率也很低,请问您是怎么解决的呢?
10楼2023-04-15 01:03:39
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