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江湖一后生

银虫 (小有名气)

[求助] 求助长片段克隆，7.4kb片段P不出来，求助。已有2人参与

7.4kb的长片段克隆后构建表达载体，现在一直P不出来，求各位前辈指导，以及后面后面构建载体时需要注意什么。

@biostar2009 @biostar2009 @飞约疯人院 @wizardfan 发自小木虫Android客户端
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1楼2019-11-08 15:02:48
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HLYY

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物版感谢您的关注与支持。 2019-11-10 21:46:50
7.4k片段P不出来考虑模板是否反复冻融有降解，反复冻融或者降解的模板很难扩出长片段；试剂你用的是否是专门用来长片段扩增的，引物设计有没有问题。构建载体要注意的问题有点多呀，你有没有具体哪方面想问的。
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2楼2019-11-08 15:44:13
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可爱宝宝

新虫 (正式写手)
长片段需要特殊的酶

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3楼2019-11-08 15:47:18
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上官绿叶

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 可爱宝宝 at 2019-11-08 15:47:18
长片段需要特殊的酶

麻烦问一下 长片段用什么酶P

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4楼2019-12-03 16:20:16
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MAZ4HK

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by 上官绿叶 at 2019-12-03 16:20:16
麻烦问一下 长片段用什么酶P
...

Long amp taq.  NEB公司的。

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5楼2019-12-06 19:43:11
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