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阴离子色谱柱DEAE已有2人参与
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大家好！我目前在做解淀粉芽孢杆菌中抗菌蛋白的分离纯化方面，这个抗菌蛋白之前师兄做出来过，所以他的性质已知。但是我重复师兄的实验一直没有重现出来。目前遇到的问题就是，我用0-60%的硫酸铵沉淀，透析，过DEAE阴离子柱。我的柱子体积是125立方厘米，填料是50毫升左右，上样量是60毫升左右。但目前遇到的问题是 没有流穿峰，也是有，就是坡很缓，谱图检测的吸光度不超过0.1，但是用0.4M NaCl+Tris-HCl洗脱可以检测到峰，而1M NaCl+Tris-HCl没有东西洗下来。但是用0.5M NaOH+1M NaCl洗脱时，可以看到明显的峰。我不太清楚原因。师兄之前做的时用这两个盐浓度直接洗下来的，可以看到三个明显而且很漂亮的峰，并且可以证明了用1M NaCl+Tris-HCl洗下来的峰液有抑菌效果，但是我就是1M的时候洗不下来。而且用0.5MNoOH清洗时，出来了很漂亮的峰，这些难道都是杂蛋白吗。 综上所述，我想问两个问题: 1.为什么过阴离子色谱柱DEAE时，没有穿透峰，或者穿透峰很坡，很矮，吸光度不超过0.1？ 2.为什么0.5M NaOH清洗时，会出来这么多东西，难道都是杂蛋白吗？ 第一幅图是0.4M NaCl洗下来的图谱 第二幅图是0.5M NaOH洗下来的图谱   发自小木虫Android客户端 |
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