蛋白提取SDS-PAGE，条带总是很弱 - 分子生物 - 分子生理 - 第2页小木虫论坛-学术科研互动平台

大浪淘沙

11楼2019-10-29 21:30:16

猴普夫尔

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楼主你好，你这个buffer有点奇怪呀。首先，曲拉通是什么？Triton嘛？如果是的话，为什么要在SDS-PAGE里加这种非离子性去垢剂呢？加了SDS，样品全部变性了呀。

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向着太阳生长

12楼2019-11-01 07:45:11

猴普夫尔

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还有，你超声破碎过程中有没有加蛋白酶抑制剂？并且，超声的时候样品还得保持低温。否则，蛋白质会降解。超声之前有没有测量菌液的OD600？0.1g菌液比1 ml缓冲液并不能说明菌液浓度。如果是你加菌都条带很弱，应该考虑优化蛋白质表达的条件。包括温度，转速和培养时间的长短等。

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向着太阳生长

13楼2019-11-01 07:52:09

lren_87

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13楼: Originally posted by 猴普夫尔 at 2019-11-01 07:52:09
还有，你超声破碎过程中有没有加蛋白酶抑制剂？并且，超声的时候样品还得保持低温。否则，蛋白质会降解。超声之前有没有测量菌液的OD600？0.1g菌液比1 ml缓冲液并不能说明菌液浓度。如果是你加菌都条带很弱，应该考 ...

破碎的时候加了PMSF的，也是低温破碎的，降解应该不会太严重。纯的大肠杆菌破碎后跑胶条带都很弱，所考虑是提取后浓度过低，现在想办法提高提取后浓度。

大浪淘沙

14楼2019-11-03 16:44:30

猴普夫尔

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引用回帖:

14楼: Originally posted by lren_87 at 2019-11-03 09:44:30
破碎的时候加了PMSF的，也是低温破碎的，降解应该不会太严重。纯的大肠杆菌破碎后跑胶条带都很弱，所考虑是提取后浓度过低，现在想办法提高提取后浓度。...

嗯，那就是调整诱导条件了。祝好

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向着太阳生长

15楼2019-11-04 04:58:47

ZUOZUOYa

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我们不加DNA酶的，，要加蛋白酶抑制剂，不过有的蛋白不加也行，跑胶没问题

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16楼2019-12-02 01:44:38