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大浪淘沙

1楼2019-10-24 00:04:05

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yubeihong

铁杆木虫 (职业作家)

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杂带都不高，细胞表达问题

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8楼2019-10-28 22:35:11

猴普夫尔

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还有，你超声破碎过程中有没有加蛋白酶抑制剂？并且，超声的时候样品还得保持低温。否则，蛋白质会降解。超声之前有没有测量菌液的OD600？0.1g菌液比1 ml缓冲液并不能说明菌液浓度。如果是你加菌都条带很弱，应该考虑优化蛋白质表达的条件。包括温度，转速和培养时间的长短等。

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向着太阳生长

13楼2019-11-01 07:52:09

普通回帖

xinxinjin

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蛋白含量低呀

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2楼2019-10-24 00:22:04

lren_87

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傻子乐

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2楼: Originally posted by xinxinjin at 2019-10-24 00:22:04
蛋白含量低呀

我也知道鸭，求分析原因和解决办法。

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大浪淘沙

3楼2019-10-24 06:52:39

13297913532

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有的地方不清楚哈，加DNase这个是，还有小试表达蛋白的条带亮吗？

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4楼2019-10-25 22:58:52

lren_87

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4楼: Originally posted by 13297913532 at 2019-10-25 22:58:52
有的地方不清楚哈，加DNase这个是，还有小试表达蛋白的条带亮吗？

哪里需要补充信息？加DNase主要是消化掉核酸，否则泳道抛出来都有阴影（核酸的），没有小试，实际是直接用大肠杆菌跑都没跑出漂亮的带，也就是说，压根没破碎好

大浪淘沙

5楼2019-10-26 16:10:59

fairy2015

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【答案】应助回帖

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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2019-10-29 22:47:42

淡的话一般就是蛋白含量低，可能是表达低，也可以是你破碎的问题。

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6楼2019-10-28 21:29:45

LuckilyH

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可能上样量不够，要不就是表达量不高

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7楼2019-10-28 21:58:45

lren_87

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6楼: Originally posted by fairy2015 at 2019-10-28 21:29:45
淡的话一般就是蛋白含量低，可能是表达低，也可以是你破碎的问题。

我想，非目标条带都弱，应该是浓度低，但是不知道什么原因

大浪淘沙

9楼2019-10-29 21:26:32

lren_87

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7楼: Originally posted by LuckilyH at 2019-10-28 21:58:45
可能上样量不够，要不就是表达量不高

我想应该是浓度问题，我也会试着加大上样量，但是表达量不高应该是目标条带不亮，但是现在是整体都不亮。

大浪淘沙

10楼2019-10-29 21:29:41