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【调剂】北京石油化工学院2024年16个专业接受调剂
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ap372767129

铁虫 (正式写手)

[求助] 重组淀粉酶蛋白在大肠杆菌BL21中表达,酶活低已有1人参与

我做的是一种淀粉酶,将基因连接至pET20b(+)中并于大肠杆菌BL21(DE3)中表达,诱导温度为25℃。最后菌液上清和发酵液均经过镍柱纯化后跑蛋白电泳都有单一条带(最右侧那条粗的),位置也正确,是表达的酶蛋白。但发现虽然蛋白有活力,但是酶活力很低。出现这种现象的原因是什么呢?是诱导温度还是太高吗?我看有虫友还说过换了表达宿主就有活力了等等。我该怎样提高,酶活力呢,请各位大神不吝赐教。拜谢!

重组淀粉酶蛋白在大肠杆菌BL21中表达,酶活低
QQ截图20191018200522.jpg
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dppdpp

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
能加微信吗?我有带标签的质粒可以给你试一试

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
2楼2019-10-18 22:20:18
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biosci

捐助贵宾 (职业作家)


有可能你这个蛋白本来就酶活力低

发自小木虫Android客户端
3楼2019-10-19 13:47:50
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sea4on

新虫 (小有名气)

野生菌产的蛋白比活如何?本身性质不行再优化也是徒劳。

发自小木虫IOS客户端
4楼2019-10-20 23:45:24
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why9639

木虫 (正式写手)

维斯特洛大陆守门员

大肠表达淀粉酶活力低的很,用枯草或者地衣,解淀粉都很高

发自小木虫Android客户端
十有九人堪白眼,百无一用是书生
5楼2019-10-23 15:46:35
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ap372767129

铁虫 (正式写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by why9639 at 2019-10-23 15:46:35
大肠表达淀粉酶活力低的很,用枯草或者地衣,解淀粉都很高

好的 谢谢
6楼2019-10-30 19:13:14
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ap372767129

铁虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by sea4on at 2019-10-20 23:45:24
野生菌产的蛋白比活如何?本身性质不行再优化也是徒劳。

这段基因是从NCBI上找到的,没有野生菌
7楼2019-10-30 19:20:54
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