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匿名

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hly英子(金币+1): 谢谢参与
65℃的目的条带挺亮的,能P出来就行。另外杂带一直存在可能是引物不特异的原因
11楼2019-09-15 08:36:35
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匿名

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12楼2019-09-15 09:21:33
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引用回帖:
12楼: Originally posted by hly英子 at 2019-09-15 09:21:33
嗯,会影响后面构建表达载体吗,或者蛋白表达
...

把目的条带切胶回收,构建重组载体,测序正确就没有问题
13楼2019-09-15 10:15:49
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匿名

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15楼2019-09-15 11:44:20
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lemonchen96

新虫 (初入文坛)



hly英子(金币+1): 谢谢参与
只要构建出来载体测序结果正确对后续蛋白表达纯化就没有影响,但是如果你想跑出好看的条带你可以尝试将回收的条带用你的引物再pcr一下,特异性应该会很多,但是感觉没什么必要
16楼2019-09-15 20:35:21
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jmmchen

金虫 (正式写手)



hly英子(金币+1): 谢谢参与
最上面一条带是非特异性扩增,中间是目的条带,最下面还有引物二聚体。65℃已经挺高的退火温度了,说明你的引物设计不太好,可以换一下引物,或者采用高保真的反应体系进行扩增,应该会消除非特异扩增。

发自小木虫Android客户端
19楼2019-11-27 04:59:15
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xqyqwy2楼
2019-09-14 14:52   回复  
hly英子(金币+1): 谢谢参与
发自小木虫Android客户端
2019-09-14 14:54   回复  
hly英子(金币+1): 谢谢参与
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solarzhao4楼
2019-09-14 14:55   回复  
hly英子(金币+1): 谢谢参与
发自小木虫Android客户端
2019-09-14 16:37   回复  
hly英子(金币+1): 谢谢参与
nono20096楼
2019-09-14 20:01   回复  
hly英子(金币+1): 谢谢参与
·
2019-09-14 21:48   回复  
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syhorchid8楼
2019-09-15 00:48   回复  
hly英子(金币+1): 谢谢参与
2019-09-15 07:15   回复  
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xhmaohan10楼
2019-09-15 07:26   回复  
hly英子(金币+1): 谢谢参与
发自小木虫Android客户端
2019-09-15 10:25   回复  
hly英子(金币+1): 谢谢参与
发自小木虫Android客户端
2019-09-16 08:50   回复  
hly英子(金币+1): 谢谢参与
Genifer18楼
2019-09-16 14:56   回复  
hly英子(金币+1): 谢谢参与
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