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【调剂】北京石油化工学院2024年16个专业接受调剂
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逍遥者LLEC

新虫 (知名作家)

[交流] 核酸提取已有6人参与

提取DNA时,测定OD值,A260/A230比值在3.5-4.2之间,感觉好高,A260/A280 在2.0-2.1之间,请问之前各位有过这样的经历么

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xinxinjin

银虫 (职业作家)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2019-08-21 21:52:11
一般看260/280,比值在1.8-2.0比较好

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2楼2019-08-20 23:46:44
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yubeihong

铁杆木虫 (职业作家)


3楼2019-08-22 15:51:09
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最亮xin

木虫 (职业作家)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by yubeihong at 2019-08-22 15:51:09
没洗干净盐

没洗干净盐不应该是OD260/OD230小于2.0的吗?

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想吃酸菜鱼、榴莲披萨、炸鸡、辛拉面、五谷渔粉
4楼2020-01-06 13:16:24
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逍遥者LLEC

新虫 (知名作家)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 最亮xin at 2020-01-06 13:16:24
没洗干净盐不应该是OD260/OD230小于2.0的吗?
...

谢谢

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5楼2020-01-06 16:21:06
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3279464

铁虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
主要还是看260/280  能控制到1.8左右最好  230的比值相对没那么太看重
提供优质的核酸提取以及鼠尾鉴定一站式服务。
6楼2020-03-24 10:30:07
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新芝生物

铁虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
新芝生物:滤膜法好?还是磁珠法好?教如何从源头完美避开实验误差?
滤膜法:
又叫吸附柱式法,他主要采用自动移液和离心机(或者加压法)相结合的方法。将含有核酸的溶液加入吸附柱的吸附膜中,核酸会被吸附膜吸附保留,再利用离心或加压法的方式除去液体,再利用机械臂上的吸头向管内加入新的试剂。经过细胞裂解,核酸吸附,清洗与洗脱,最终将吸附柱上干净的核酸溶解至相应的试剂中,然后离心或加压的方式获得最纯的核酸溶液。

磁珠法它又分为移液法和磁棒法
移液法:
主要是利用操作系统控制机械臂来完成移液。将吸附有核酸的磁珠固定磁力架上,待磁珠与溶液分离,再利用机械臂上的吸头将液体移出,更换新吸头向管内加入新的试剂,然后利用吸头进行吸打混匀。经过细胞裂解,核酸吸附,清洗与洗脱,最终将磁珠上干净的核酸溶解至相应的试剂中,然后待磁珠与液体完全分离,保留相应的溶液,即获得最纯的核酸溶液。

磁棒法:
主要是利用机器内磁棒架上的磁棒,将吸附有核酸的磁珠移动至不同的试剂槽内,再利用套在磁棒外层的磁棒套,反复上下运动搅拌液体,混合均匀。经过细胞裂解,核酸吸附,清洗与洗脱,最终将磁珠上干净的核酸溶解至相应的试剂中,然后将磁珠移出孔槽,保留相应的溶液,即获得最纯的核酸溶液。

从技术原理上来看,移液法和吸附柱式相对磁棒法是存在一定的技术劣势的:
移液法:1、取液的时候会存在液体残留(尤其是血液类的样本)
        2、取液时容易将磁珠吸走
        3、如果存在固体残留,会堵住枪头
吸附柱式:1、当存在固体残留时,会存在堵住滤膜的风险
        2、一旦吸附柱存在残次品,会存在漏液现象
          3、操作时间长
核酸提取
滤膜法.jpg


核酸提取-1
移液法.jpg


核酸提取-2
磁棒法.jpg
7楼2020-04-27 09:18:28
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山舞银蛇

铁杆木虫 (正式写手)

浓度低了吧?
核酸提取与Taqman诊断
8楼2020-05-07 09:33:10
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