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【调剂】北京石油化工学院2024年16个专业接受调剂
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银虫 (小有名气)
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1.DE-52层析填料染色严重2怎样才算提到纯的蛋白
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1.因粗提蛋白有颜色，上样之后填料被染色，如图1。请问对之后层析步骤有影响吗？怎么去除呢？我尝试了0.1M 氢氧化钠+2MNacl效果并不明显。
2.将出峰蛋白浓缩后电泳如图二，左为maker，1和4，算是纯化完全吗？我还要过凝胶柱吗？

1.DE-52层析填料染色严重2怎样才算提到纯的蛋白


1.DE-52层析填料染色严重2怎样才算提到纯的蛋白-1


1.DE-52层析填料染色严重2怎样才算提到纯的蛋白-2


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1楼2019-08-18 15:26:06
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sannny

新虫 (正式写手)
★
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首先，你装柱体积太大了。根据你的上样量选择合适的装柱体积。其次，色素用0.5M及以上的氢氧化钠浓度去洗脱，可以适当浸泡，但不可能全部去掉。第三，洗脱梯度是怎么样的？电泳图上看不出来，但纯化效果不怎么样，我觉得洗脱条件还可以继续优化。第四，试试其他类型的纯化填料。

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20楼2019-08-18 16:15:26
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sannny

新虫 (正式写手)
楼主可以把你的层析柱架子拍个全图嘛？看一看。没见过这种。

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22楼2019-08-18 16:16:38
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小苑子|

新虫 (初入文坛)
★
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柱子体积太大了吧，纯化效果还是有些瑕疵，洗脱液的浓度要优化些吧

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51楼2019-08-20 12:23:25
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walking dead

金虫 (小有名气)
★
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你这些条带可以标一下都是些什么？MARK和目标蛋白也标一下。上样纯化后柱子带颜色，用再生处理也没用，可以用酒精洗洗。另外你的样品有颜色可以考虑脱色的填料。你可以考虑一下除了DEAE-52填料外的其他填料。可以找我
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74楼2021-05-06 10:07:58
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walking dead

金虫 (小有名气)
★
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DEAE-52是纤维素基质的弱阴离子交换，说实话，多糖类的填料对色素吸附很严重的。我建议你咨询蓝晓科技的亲水修饰聚合物离子交换填料，这个填料颗粒均一性好，载量和刚性都很好，最重要的是适合天然产物，好多带颜色的蛋白的纯化。柱子后面再生后可恢复白色。
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79楼2021-06-12 17:31:40
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onetwo哥

新虫 (小有名气)
★
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不纯，只有目标条带

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85楼2023-06-19 09:25:54
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纯化扫地僧

新虫 (小有名气)
★
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用可耐受的有机溶剂清洗，比如异丙醇之类；

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96楼2023-10-13 08:35:51
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纯化扫地僧

新虫 (小有名气)
一般纯的蛋白一步纯化拿不到，需要结合蛋白特性，两到三步应该就有结果

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97楼2023-10-13 08:37:00
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hdchina20102楼
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