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【调剂】北京石油化工学院2024年16个专业接受调剂
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pomelolk

铜虫 (小有名气)

[求助] 关于CRP胶乳比浊实验的问题已有2人参与

目前我在做CRP胶乳免疫比浊的实验，结果时好时坏。
在同样的条件下，每个批次做出的结果都不一样。有的时候结果很好，无论从线性还是吸光度上来看都没有问题，但是第二天做的时候就能出现测不出吸光度的现象或者是在最高点出现掉值的现象。往复已经好几个月了。尝试过更换活化剂的浓度，尝试过活化时间，活化缓冲液的种类、离子强度、pH、抗体的种类筛选、厂家筛选、抗体的浓度、微球的种类、微球的浓度、偶联缓冲液的离子强度、pH、偶联缓冲液的种类，封闭剂的种类，浓度，以及储存液的各种条件等等。奇怪的是每次更换条件都有好的结果出现，但是第二次重复却怎样也重复不出来这种好的结果。我是真的有点无能为力了。
请各位老师给点意见吧。我感觉我的心态要崩溃了。
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1楼2019-08-12 16:12:38
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pomelolk

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by dhrx25 at 2019-08-15 08:52:22
我也是同样的问题，现在在做另一项目，也是胶乳比浊的，做了半年了，结果也是时好时坏，实验结果经常不可重现，同样的过程第二天就重复不出第一天的结果，做得很累，又无法得到好的结果，很想知道偶联的关键点在哪里 ...

我试过偶联条件的摸索，也就是活化剂含量的摸索，这次重复出两次一致的结果，都很好。所以我目前觉得在活化阶段应该不存在什么问题。主要在偶联的阶段，因为我是做小量的实验，所以我现在怀疑每次在恒温震荡箱中混匀的效果并不好，可能会造成很大的影响。因此我目前在试着将偶联液多加一些，来使得整体的环境稳定一些再试试看。
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3楼2019-08-15 11:32:46
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dhrx25

铁虫 (初入文坛)
我也是同样的问题，现在在做另一项目，也是胶乳比浊的，做了半年了，结果也是时好时坏，实验结果经常不可重现，同样的过程第二天就重复不出第一天的结果，做得很累，又无法得到好的结果，很想知道偶联的关键点在哪里？
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2楼2019-08-15 08:52:22
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pomelolk

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by dhrx25 at 2019-08-15 08:52:22
我也是同样的问题，现在在做另一项目，也是胶乳比浊的，做了半年了，结果也是时好时坏，实验结果经常不可重现，同样的过程第二天就重复不出第一天的结果，做得很累，又无法得到好的结果，很想知道偶联的关键点在哪里 ...

我这个问题解决了
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4楼2019-08-20 13:43:11
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dhrx25

铁虫 (初入文坛)
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4楼: Originally posted by pomelolk at 2019-08-20 13:43:11
我这个问题解决了...

请问一下是哪一步的问题，关键点在哪？
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5楼2019-08-21 17:22:01
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dhrx25

铁虫 (初入文坛)
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4楼: Originally posted by pomelolk at 2019-08-20 13:43:11
我这个问题解决了...

请问一下是哪一步的问题，关键点在哪？万分感谢，我也很迷茫，做来做去都做不好.
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6楼2019-08-22 09:00:44
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pomelolk

铜虫 (小有名气)
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5楼: Originally posted by dhrx25 at 2019-08-21 17:22:01
请问一下是哪一步的问题，关键点在哪？...

主要还是偶联那里的问题

发自小木虫IOS客户端
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7楼2019-08-22 11:30:13
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dhrx25

铁虫 (初入文坛)
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7楼: Originally posted by pomelolk at 2019-08-22 11:30:13
主要还是偶联那里的问题
...

具体是偶联的哪一步呢，缓冲液的用量，混匀的方式，还是其他的？
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8楼2019-08-22 15:12:45
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pomelolk

铜虫 (小有名气)
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8楼: Originally posted by dhrx25 at 2019-08-22 15:12:45
具体是偶联的哪一步呢，缓冲液的用量，混匀的方式，还是其他的？...

偶联方面要确定混匀一定要均匀，我用的是220rpm的转速。还有就是偶联的pH值。我这次成功的是用两步法，其中活化剂的含量也是很重要的。你可以控制现在的抗体和微球的量不变，在确定混匀能够完全均匀的情况下，逐步摸索一下活化剂的用量，偶联液pH。
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9楼2019-08-23 16:20:32
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dhrx25

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by pomelolk at 2019-08-23 16:20:32
偶联方面要确定混匀一定要均匀，我用的是220rpm的转速。还有就是偶联的pH值。我这次成功的是用两步法，其中活化剂的含量也是很重要的。你可以控制现在的抗体和微球的量不变，在确定混匀能够完全均匀的情况下，逐步 ...

我又迷茫了，转速我用的是210rpm，配制小样量很少，应该是可以混匀了。我一直用的是两步法，偶联pH值也试过四五个，活化剂没有像网上说的每mol的羧基应该再多加2~3mol的EDC，这量感觉太大，活化剂你是用NHS/EDC，还是单EDC.
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10楼2019-08-23 17:22:53
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