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【码住】细胞划痕面积的计算方式！！
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细胞划痕实验是一种简单易行的检测细胞运动的方法，实验成本低，可以用来检测贴壁生长肿瘤细胞的侵袭转移能力。下面是用Image J来对细胞划痕面积进行较为详细的说明： Image J安装包可以在文章最后领取。仅为学习所用~ 一、划痕实验的实验原理和步骤 先简单的回顾下划痕实验的实验原理和实验步骤。 1.实验原理 细胞划痕法是测定肿瘤细胞的运动特性的方法之一，是在体外培养的单层细胞上划痕致伤，观察肿瘤细胞的迁移情况。 2.实验步骤 ① 培养板接种细胞之前先用marker笔在6孔板背面画横线标记（方便拍照时定位同一个视野）； ② 细胞消化后接入6孔板，数量以贴壁后铺满板底为宜（数量少时可培养一段时间至铺满板底）； ③ 细胞铺满板底后，用10μL枪头垂直于孔板制造细胞划痕，尽量保证各个划痕宽度一致； ④ 培养板接种细胞之前先用marker笔在6孔板背面画横线标记（方便拍照时定位同一个视野）； ⑤ 加入含有4μg/mL丝裂霉素（防止细胞增殖过快）的完全/基础培养基，拍照记录； ⑥ 将培养板放入培养箱培养(不同时间点取出拍照)； ⑦ 利用Image J分析实验结果。 二、标尺校正 1、不进行标尺校正，得到的长度单位为pixel（像素），面积单位为平方像素（pixel2）。 2、打开一张带有标尺的图片，选择直线工具，在标尺上沿着标尺画一条直线。 3、点击【Analyze】→Set Scale 4、点击Click to Remove Scale，再在Known distance填250μm，然后在Unit of length填入单位（μm） 5、选择Global为对之后打开的图片都有效（必选项） 三、划痕距离测定操作步骤 1、划痕面积 ① 面积检测方法（划痕距离测量为等效测量） 划痕宽度平均值=划痕空隙面积/长度。 细胞迁移率=(0h划痕宽度-培养后划痕宽度)/0h划痕宽度×100% ② 转化灰度图 选择【Image】，点击【Type】，然后在点击【8-bit】 ③ 增强对比 点击【Process】，然后选择【enhance contrast】 【Saturated pixels】中选择0.3，默认Normalize，最后点击【OK】 ④ 平滑+寻找边缘、阈值设定 平滑边缘：Process→Smooth（Ctrl+shift+S） 寻找边缘：Process→Find Edges 阈值设定:【Image】→Adjust→Threshold（Ctrl+shift+T） ⑤ 设置和选择 选中为红色，调节阈值为0-20。点击【Apply】 选择【工具栏】中的魔棒工具，在划痕面积处点击 弹出的Wand Tool中的【Tolerance】选择2，点击OK,然后再在【Anlyze】-Measure ,注意其中Tips：Ctrl+M 2、划痕长度 画线：点击【工具栏】中的直线选择工具'，纵向画一条笔直的线 分析：Ctrl+M 四、结果分析 1、面积分析 2、长度分析 细胞迁移率=(235.274-131.495)/235.274×100%=44.30 五、操作小结 灰度转化：在所有步骤前，必须进行灰度转化。 增强和对比：突出划痕区域，便于后续魔棒选择划痕区域。 参数设置：该步骤（魔棒选择区域）可能一次不成功，可在参数设置区进行调整。 单位：若未校正则面积或长度单位均为像素，即pixels2或pixels。  1.1.jpg  1.2.jpg  1.3.jpg  1.4.jpg  1.5.jpg  3.1.jpg  3.2.jpg  3.3.1.jpg  3.3.2.jpg  3.4.1.jpg  3.4.2.jpg  3.4.3.jpg  3.5.1.jpg  3.5.2.jpg  3.5.3.jpg  3.6.jpg  4.1.jpg  4.2.jpg |
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2019-06-17 11:09:58, 73.21 K
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