【调剂】北京石油化工学院2024年16个专业接受调剂
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zero19871029

新虫 (小有名气)

[求助] CRISPR体外转录sgRNA出现两条带已有1人参与

求助帮忙找原因,做sgRNA体外转录,用的是Takara的kit,之前做都没有什么问题,这次做的两条gRNA转录出了两条带,一条100bp多一点是目的带,另一条80bp左右是未知条带。PCR template只有一条单一条带,结果如图所示,大家帮忙找找原因,跪谢!

CRISPR体外转录sgRNA出现两条带
PCR Template


CRISPR体外转录sgRNA出现两条带-1
SGRNA
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jie123400

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

应该是有二级结构存在。
3楼2019-08-20 16:41:29
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MAZ4HK

新虫 (初入文坛)

没有用过这个kit,我们都是让公司合成sgRNA。价格不贵,质量有保证

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5楼2019-12-06 19:22:22
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学无201905

新虫 (小有名气)

我也想知道答案,帮您顶一下

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2楼2019-05-29 12:54:50
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mifengwang

新虫 (初入文坛)

没关系的,是因为你纯化过程发生了降解,你去做一下体外酶切,能切开就能用。

发自小木虫Android客户端
7楼2020-01-22 18:48:34
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普通回帖

lksuccess

木虫 (正式写手)

不懂,会不会其中有部分降解了,导致分子量减小?

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帮助别人就是帮助自己!
4楼2019-11-23 07:27:02
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mifengwang

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by MAZ4HK at 2019-12-06 19:22:22
没有用过这个kit,我们都是让公司合成sgRNA。价格不贵,质量有保证

你们一般让哪个公司合成啊?

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6楼2020-01-22 18:47:22
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长夜行与君

新虫 (初入文坛)

我也是这个问题,请问楼主找出原因了吗?怎么解决的
8楼2020-06-15 10:02:03
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andywang6137

金虫 (著名写手)

你好,请问你的问题解决了吗?我也是sgRNA  2条带。
9楼2020-07-07 16:54:52
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andywang6137

金虫 (著名写手)

引用回帖:
7楼: Originally posted by mifengwang at 2020-01-22 18:48:34
没关系的,是因为你纯化过程发生了降解,你去做一下体外酶切,能切开就能用。

sgRNA 2条带,是因为你纯化过程发生了降解吗?体外酶切怎么验证啊?
10楼2020-07-07 16:55:46
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