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请教用反转录pcr扩增目的片段
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生工试剂盒提取霉菌rna，两步法进行反转录，遇到这样的问题：测序结果含有内含子。怀疑可能有dna污染，于是用rna代替cdna直接进行第二步反转录，发现有很亮的条带，确定有dna污染，但是用dnase1消化之后rna也几乎没有。本人觉得提取的rna有dna污染肯定是无法避免的，但是只要有dna就会p出内含子，消化酶消化dna又会让rna降解。还有就是用含有dna污染的rna代替cdna进行反转录第二步pcr（7对不同片段的引物），有一个目的片段条带大小居然是正确的，而另两个条带偏大，应该是含有内含子，剩下的没有条带。还有想问一下跨越内含子设计引物对我的目的蛋白（酶）的结构有没有影响，还有请大家分析一下我的rna质量(发图),跪求大拿指点一二啊，给跪了! @biostar2009 @youlinglyw @wizardfan 发自小木虫Android客户端 |
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