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张嫚嫚

新虫 (初入文坛)

[交流] 构建载体目的基因一直P不出来?求大佬支援已有2人参与

目的基因的片段不长,分别450bp和660bp,模版确定没问题(师兄用该模版能p出来),最开始用CDS序列在Primer5设计的加了酶切位点的引物,没P出来;后来,师兄建议2p,又设计了不加酶切位点的引物,有条带,回收测序后,不对;又在CDS 5’UTR和3’UTR延伸了一段序列,设计了引物同样没加酶切位点,完全没条带。现在不知道怎么办了……各位大佬给提提意见

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木元雨

新虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
检测下该基因在该模板里的表达量

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2楼2019-05-15 19:51:08
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张嫚嫚

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 木元雨 at 2019-05-15 19:51:08
检测下该基因在该模板里的表达量

请问如何检测?没有做过。谢谢你

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3楼2019-05-15 20:24:11
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freehomefc

新虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
检测基因的表达应该是RT -PCR 或者qpcr

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4楼2019-05-15 23:20:21
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张嫚嫚

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by freehomefc at 2019-05-15 23:20:21
检测基因的表达应该是RT -PCR 或者qpcr

明白了,谢谢

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5楼2019-05-16 00:02:10
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木元雨

新虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by 张嫚嫚 at 2019-05-15 20:24:11
请问如何检测?没有做过。谢谢你
...

做一个半定量的pcr,跑电泳就可以了。

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6楼2019-05-16 11:10:36
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