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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 动植物 » 实验技术 » 构建载体目的基因一直P不出来？求大佬支援
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张嫚嫚

新虫 (初入文坛)

[交流] 构建载体目的基因一直P不出来？求大佬支援已有3人参与

目的基因的片段不长，分别450bp和660bp，模版确定没问题（师兄用该模版能p出来），最开始用CDS序列在Primer5设计的加了酶切位点的引物，没P出来；后来，师兄建议2p，又设计了不加酶切位点的引物，有条带，回收测序后，不对；又在CDS 5’UTR和3’UTR延伸了一段序列，设计了引物同样没加酶切位点，完全没条带。现在不知道怎么办了……各位大佬给提提意见

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1楼2019-05-15 19:48:03
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木元雨

新虫 (著名写手)
★
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检测下该基因在该模板里的表达量

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2楼2019-05-15 19:51:08
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张嫚嫚

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 木元雨 at 2019-05-15 19:51:08
检测下该基因在该模板里的表达量

请问如何检测？没有做过。谢谢你

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3楼2019-05-15 20:24:11
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freehomefc

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
检测基因的表达应该是RT -PCR 或者qpcr

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4楼2019-05-15 23:20:21
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张嫚嫚

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by freehomefc at 2019-05-15 23:20:21
检测基因的表达应该是RT -PCR 或者qpcr

明白了，谢谢

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5楼2019-05-16 00:02:10
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木元雨

新虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by 张嫚嫚 at 2019-05-15 20:24:11
请问如何检测？没有做过。谢谢你
...

做一个半定量的pcr，跑电泳就可以了。

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6楼2019-05-16 11:10:36
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tongbujing

禁言 (初入文坛)
本帖内容被屏蔽
7楼2019-06-16 16:42:07
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