【调剂】北京石油化工学院2024年16个专业接受调剂
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15761622115

铁虫 (小有名气)

[求助] 我提质粒pcDNA6,提取的浓度很低,十几纳克每微升,希望大家帮帮我已有1人参与

请大家多多帮忙,我的质粒抽不出来,快愁死我了,提质粒一个多月了。
这个质粒一年前提出来过,现在同样的方法提不出来了。和别的质粒一起提,其他质粒浓度都正常,就这个质粒浓度很低,一直提不出来。
1、碧云天的一步法制备感受态试剂盒制备感受态,实验室也一直用这个。
2、质粒转化DH5α。菌落长得也挺正常,每次都能长十几个,有几次长了卫星菌落。
3、15ml LB摇床12-16h都试过,OD600在2.4左右。
4、质粒提取用的是天根的。
5、每次和别的质粒一起提,别的都能提出来,就这个提的浓度特别特别低。
裂解液每次不超过5min,严格按照试剂盒的步骤,实在不知道问题出在哪了。

该怎弄,虫友们帮帮忙呀
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wuhu0612331

铜虫 (正式写手)

2楼2019-05-15 12:40:46
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15761622115

铁虫 (小有名气)

是高拷贝的,质粒是pcDNA6/TR,准备做四环素诱导系统。

发自小木虫Android客户端
3楼2019-05-15 16:52:22
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15761622115

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by wuhu0612331 at 2019-05-15 05:40:46
是不是个低拷贝质粒

是高拷贝的

发自小木虫Android客户端
4楼2019-05-15 16:52:40
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wuhu0612331

铜虫 (正式写手)

要不你转别的感受态试试,比如TOP10  TG-1

发自小木虫Android客户端
5楼2019-05-15 17:30:51
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axian1

新虫 (著名写手)

换个试剂盒,或者最后一步少加点溶解液。延长摇床时间。(个人想法)
如果“别的都能提出来,就这个提的浓度特别特别低。”可能是转化步骤
6楼2019-05-26 06:08:15
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匿名

本帖仅楼主可见
7楼2019-06-20 16:22:06
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Sily2020

新虫 (小有名气)

OD600在2,4左右是摇菌之后测了紫外吗
8楼2021-01-08 18:58:52
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Sily2020

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

OD600在2.4左右的意思是摇菌之后就测了紫外吗
9楼2021-01-08 19:00:07
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junjieshao

禁虫 (小有名气)

本帖内容被屏蔽

10楼2021-01-13 03:49:42
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