应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜     石溪大学接受考研调剂申请>

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 克隆小白有问题请教～～～ 平板无菌落TT
【调剂】北京石油化工学院2024年16个专业接受调剂
61/1返回列表
查看: 901  |  回复: 5
只看楼主@他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
【有奖交流】积极回复本帖子，参与交流，就有机会分得作者 skynet999 的 50 个金币

skynet999

新虫 (初入文坛)

[交流] 克隆小白有问题请教～～～ 平板无菌落TT

求助盆友们～ 最近做了一个月的cloning无果… 很悲伤 详情如下：

载体10787bp EcoRI 和BglII双酶切 酶切位点很近 都是NEB的酶 取5ugDNA  50ul体系 酶切后成功胶回收 浓度大概160ng/ul

PCR产物200bp 为了提高片段浓度 合并了几次pcr产物 然后胶回收 过夜双酶切 也用的50ul体系 酶切后用PCR产物纯化Kit 得到PCR产物浓度大概200ng/ul

连接用了20ul体系 T4连接酶1ul 载体4ul PCR产物6ul 室温连接两小时后转化 第二天平板特别干净 无克隆菌落… 这是第三次做这个实验了 之前两次也是没有克隆 不过加的载体和PCR产物量比较少 所以这次加大量 还是无果… 表示不知道什么原因 每次跑胶看条带也都很正常 实在找不到症结所在 TT 求助大家伙儿………

发自小木虫IOS客户端
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼2019-05-05 17:34:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sannny

新虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
用Gibson无缝克隆吧，包你一次成功。相当简单啊。

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
2楼2019-05-05 17:55:06
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

木元雨

木虫 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
没连接上？还是抗性弄错了？

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
3楼2019-05-05 18:02:18
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

skynet999

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 木元雨 at 2019-05-05 18:02:18
没连接上？还是抗性弄错了？

抗性肯定没错 连没连上倒是没有验证…… 感觉不应该是没连上呀

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
4楼2019-05-06 03:38:31
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

渊博震天

版主 (职业作家)

Yeast Display

优秀版主优秀版主
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
胶回收后用仪器测定的浓度吗？有没有跑胶看看，我建议多回收几管跑胶预测浓度
赞一下 回复此楼
5楼2019-05-06 09:00:39
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

木元雨

木虫 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
4楼: Originally posted by skynet999 at 2019-05-06 03:38:31
抗性肯定没错 连没连上倒是没有验证…… 感觉不应该是没连上呀
...

有没有连上，做对照实验就知道了。把阳性对照和阴性对照都做下

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
6楼2019-05-06 11:46:57
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 skynet999 的主题更新
61/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复(可上传附件) SCI英文润色翻译-EnPapers美团队-先修改后付款
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[教师之家] 国内科研环境差导致国内科研水平差的根源 +8 zju2000 2024-04-18 9/450 2024-04-24 08:50 by zju2000
[考博] 申博成果界定是根据Jcr分区还是中科院分区 +4 我属驴核动力驴 2024-04-22 5/250 2024-04-24 08:47 by 晓目崇
[教师之家] 博士论文被抄袭 +19 和尚敲小木鱼 2024-04-22 30/1500 2024-04-24 08:31 by xiaoyucau
[考博] 24年 申博 化学/材料 一作6篇sci +4 wangyp123 2024-04-23 5/250 2024-04-24 07:21 by ilovexiaobin
[论文投稿] 研二光催化6月底四篇二区什么水平 5+3 wjtab 2024-04-22 8/400 2024-04-24 00:48 by wjtab
[硕博家园] 聊天 +8 暮色恋伊人 2024-04-22 9/450 2024-04-23 21:50 by 神圣省
[论文投稿] 最近遇到这样一个问题 +4 asd123gfa689 2024-04-18 11/550 2024-04-23 20:14 by asd123gfa689
[教师之家] 刚博士毕业，入职普通一本高校 +16 保持肌肤 2024-04-20 17/850 2024-04-23 17:20 by 白菜1992
[考研] 0854－0855调剂 +5 shangannum1 2024-04-21 8/400 2024-04-23 17:08 by Dam026
[考博] 山东大学化学与化工学院刘磊课题组博士研究生招生启事 +7 sdorganic 2024-04-17 9/450 2024-04-23 16:28 by 让一切随风l
[基金申请] 特别资助审核状态 +12 pantray 2024-04-17 18/900 2024-04-23 09:50 by y20150913
[访问学者] CSC的访问学者申请，没有个评审意见，也不知道怎么改，还有必要申请吗 +3 flyingship 2024-04-20 3/150 2024-04-22 13:52 by louistom_521
[基金申请] 国社科项目，你们学校都限额申报吗？ +5 屡战屡败 2024-04-21 7/350 2024-04-22 13:03 by 屡战屡败
[论文投稿] 催稿后秒拒 +9 lizhengke06 2024-04-19 11/550 2024-04-21 22:29 by ggjjyyy
[考研] 298求调剂 +10 孙大大@ 2024-04-17 11/550 2024-04-20 18:33 by 371122gyd
[考研] 312求调剂 +3 Leroic000 2024-04-19 3/150 2024-04-20 18:19 by xinaishan
[论文投稿] 一审一个审稿人，小修，会怎么样呀？ +10 林师妹 2024-04-18 10/500 2024-04-20 18:08 by 肖虫家
[考研] 考研英语带学 +6 choice666 2024-04-18 6/300 2024-04-19 17:46 by charles-c
[有机交流] 紫外光谱 50+3 54胡 2024-04-17 3/150 2024-04-19 10:48 by Nanamiwww
[论文投稿] 投稿求助 5+3 我是洲洲啊 2024-04-17 5/250 2024-04-18 17:13 by topedit
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭