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【调剂】北京石油化工学院2024年16个专业接受调剂
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一个不小心就

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引用回帖:
10楼: Originally posted by hly英子 at 2019-05-06 13:42:56
是吗,我也不知道,但是我的未诱导和诱导没区别,是不是不表达呢,真的好捉急...

通常你需要试不同的表达载体,表达条件才能得到一个蛋白。有些蛋白的表达工作量就是很大。按目前的情况看建议你换载体试试。有的时候同一个蛋白在不同质粒上的表达差别是很明显的。
此外,可以在你的蛋白上加标签:His-SUMO,His,GST等,这样做一来有利于蛋白溶解,二来纯化方便,也能帮你确认是否表达,表达量不是很高的情况下亲和纯化还是很有用的方法。
还是不行的话尝试截短蛋白。
你也可以western blot,表达量低的情况下光SDS-PAGE是不一定看得到条带的。
这些都试了还是不行的话就认了吧。
前期并不建议去摸IPTG浓度、转速,我个人感觉这两个因素不决定蛋白表达与否。温度和诱导时的OD较为关键,OD建议~0.6。温度25以下。
21楼2019-05-06 17:34:21
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22楼2019-05-10 16:07:17
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