24小时热门版块排行榜     石溪大学接受考研调剂申请>

【调剂】北京石油化工学院2024年16个专业接受调剂
查看: 916  |  回复: 3

阳光雨露118

新虫 (小有名气)

[求助] 做定点突变时连个基因片段融合不了!!!已有1人参与

各位大神:
      你们好,我最近在做定点突变,突变位点在基因的中部,做pcr时先p出前部分基因片段和后部分片段,然后利用PCR将前部分和后部分基因片段做模板,加入上下游物做融合PCR,融合时依据引物Tm值将退火温度设置为71.5度,但总失败,求原因!求指导!!!!
回复此楼

» 猜你喜欢

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

蓝韵pretty

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
阳光雨露118: 金币+20, ★★★很有帮助 2019-04-22 15:15:57
你是做重叠延伸PCR吧?前后片段做胶回收了吗?重叠了多少个碱基呢?退火温度太高了吧?你可以设置一个梯度看看。回收回来的前后片段你可以放在一起延伸之后再以此作为模板,用两端的上下游引物进行扩增。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

2楼2019-04-17 08:48:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

阳光雨露118

新虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by 蓝韵pretty at 2019-04-17 08:48:39
你是做重叠延伸PCR吧?前后片段做胶回收了吗?重叠了多少个碱基呢?退火温度太高了吧?你可以设置一个梯度看看。回收回来的前后片段你可以放在一起延伸之后再以此作为模板,用两端的上下游引物进行扩增。

谢谢

发自小木虫Android客户端
3楼2019-05-15 10:50:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dppdpp

新虫 (正式写手)

我也做酶的突变能加你微信吗

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
4楼2019-06-23 23:32:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 阳光雨露118 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 两类问题算是白选了~ +6 jurkat.1640 2024-04-23 10/500 2024-04-24 21:18 by lucky_my2010
[硕博家园] 考研,求职还是考编? +13 xizj 2024-04-21 21/1050 2024-04-24 17:23 by jxdic
[硕博家园] 博士白读了 +35 Da_Meng_Zi 2024-04-21 39/1950 2024-04-24 16:49 by HNUZHOUHANG
[基金申请] 化学结清有情发出来了 +3 starboy7286 2024-04-20 3/150 2024-04-24 15:52 by 嘿,黑贝
[基金申请] 颜宁:基础研究应顶天立地,立地即从需求端作为问题的出发点,立项背景就是面向真实需求 +11 zju2000 2024-04-18 11/550 2024-04-24 14:55 by 1501311
[论文投稿] Chemical Engineering Journal投稿3周了,一直显示With editor状态。这是送审了吗? 10+4 yifeng11 2024-04-20 8/400 2024-04-24 14:25 by luckyeheng
[考博] 申博成果界定是根据Jcr分区还是中科院分区 +4 我属驴核动力驴 2024-04-22 5/250 2024-04-24 08:47 by 晓目崇
[博后之家] 南京大学-广州大学联合招聘博士后 欢迎广大优秀人才!!! +4 黑魔变身啾 2024-04-20 10/500 2024-04-24 07:46 by dodonaomi
[论文投稿] 最近遇到这样一个问题 +4 asd123gfa689 2024-04-18 11/550 2024-04-23 20:14 by asd123gfa689
[考博] 重庆大学计算机学院2024博士招生 +4 y_y_y_yyy 2024-04-18 6/300 2024-04-23 16:31 by 让一切随风l
[硕博家园] +8 s150535912 2024-04-18 9/450 2024-04-23 15:48 by huixiong0627
[论文投稿] 编辑返稿让改格式,这个时候能大修内容吗? +6 双倍好运锦鲤 2024-04-17 9/450 2024-04-23 09:49 by fslaser
[考博] 25申博记录贴 +6 我属驴核动力驴 2024-04-18 12/600 2024-04-22 15:50 by 诩雾
[考博] 青岛科技大学顾玉超教授课题组招收博士生 +3 yanqingwang 2024-04-19 3/150 2024-04-22 15:21 by 理科生yes
[论文投稿] 研究光催化的,好中的三四区 20+3 sl.0117 2024-04-20 3/150 2024-04-22 09:53 by bobvan
[论文投稿] 编辑是选国外的好还是国内的好。 +8 lizhengke06 2024-04-20 8/400 2024-04-22 08:58 by cuiyunjian
[论文投稿] 一审一个审稿人,小修,会怎么样呀? +10 林师妹 2024-04-18 10/500 2024-04-20 18:08 by 肖虫家
[基金申请] 估计今年青基又没戏 +11 忆念7 2024-04-18 11/550 2024-04-20 17:29 by mygod_nju
[考研] 考研英语带学 +6 choice666 2024-04-18 6/300 2024-04-19 17:46 by charles-c
[基金申请] 国自然青年基金只有一篇能第一标注,其他都是第二标注能结题吗? 10+4 lice_1987 2024-04-18 6/300 2024-04-19 08:29 by kudofaye
信息提示
请填处理意见