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【调剂】北京石油化工学院2024年16个专业接受调剂
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Wangduo1

铁虫 (初入文坛)

[求助] 多重TaqMan荧光定量PCR已有2人参与

大家好，我想咨询一些问题，我在做三重TaqMan探针实时荧光定量检测3种病原菌时时（每对引物和探针都是根据不同的基因设计的），先分别进行了单管反应，每对引物和探针都有特异性；当把三对引物和三条探针都放一个管里进行检测时，发现有一个基因一直不扩增，Ct=undetermined，扩增曲线有时直线有时曲线但均不扩增。是因为第三对的扩增序列和前两对太相近，前两对引物把第三个基因扩增完了吗？？？希望得到大家指导，谢谢

多重TaqMan荧光定量PCR
Amplification Plot1.jpg
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1楼2019-03-28 08:28:59
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wmj19890922

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2019-04-05 08:17:01
应该是产生了竞争，建议调节比例再次尝试
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2楼2019-04-01 15:31:40
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Wangduo1

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by wmj19890922 at 2019-04-01 15:31:40
应该是产生了竞争，建议调节比例再次尝试

试了几次 还是这样 可能得重新设计引物了

发自小木虫IOS客户端
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3楼2019-04-04 16:27:37
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Explor

新虫 (正式写手)
可以试下BIOG荧光定量PCR试剂盒，染料法和探针法都有。
赞一下 回复此楼
个性化基因研究、科研试剂、诊断试剂和实验服务
4楼2019-11-04 16:53:04
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宇宙小妖怪

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

在biodai多重PCR中，多重PCR的各个引物之间相互干扰和各个探针之间相互干扰分析:设计好各对引物和探针后，重新在用DNAstar软件中的Primerselect软件，打开保守在同一文件中的多重PCR的引物文件，然后两两分别选中所设计的多重引物或两两分别选中所设计的多重探针后，在“report”菜单下“primer pair dimers”,分析上下游引物的dimers。弹出的窗口中就告诉此对引物有多少个dimer，并对此对引物用dG值进行评价(通常给出最差的dG值，理论上是dG值越大越好)。 
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5楼2020-03-23 14:05:29
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迈瑞IVD

新虫 (初入文坛)
emuch: 屏蔽内容, 违规存档, 发布违规内容 2020-05-28 23:30:55
本帖内容被屏蔽
6楼2020-05-28 22:05:37
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