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[交流]
荧光定量PCR溶解曲线分析
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用的是DNA直接qPCR,所以应该不存在乙醇等杂质干扰和反转录问题,溶解曲线上62-63℃有峰出现，引物BLAST了特异性比较强 2019-3-19.png |
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| 出现这种情况，有两种可能。一个就是引物的非特异性扩增，63℃这个峰图代表的引物二聚体的等非特异性扩增条带。第二个可能就是RNA提取过程中乙醇类物质没有晾干，影响了后来的反转录，导致模板的质量不好，进而导致扩增的溶解曲线很差。不知道你这个是属于这两种情况的哪一种。至于你说的blast特异性和这个扩增的特异性他们是没有必然的联系的。我们实验室打算将提取小鼠血样中的DNA做后续的BIOG SYBR Green 荧光定量PCR检测目标DNA,我觉得一般引物设计时特异性没有问题，只是理论，关键要看实践。普通PCR的反应液、扩增程序、PCR仪器跟荧光定量PCR都不一样，所以普通PCR的结果仅供参考，一切以荧光定量PCR做出来的结果为准，希望能够帮助你。 |
2楼2019-03-19 17:19:41
