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zouyina

银虫 (小有名气)

[交流] 求大神分析DNA电泳胶图已有3人参与

这两天用手提法提取不动杆菌的基因组DNA,即溶菌酶裂解,SDS ,CTAB等处理,然后酚氯仿抽提。最后测得的DNA浓度为400ng/ul,我认为该浓度不算大,但是DNA液体吸取时非常粘稠,而且有拉丝的现象。于是我将DNA稀释8倍即50ng/ul后跑电泳,1%的胶,10000bp的marker,得到的胶图如下。请问点样孔下面的是蛋白质污染吗?我不是很清楚蛋白质污染时是孔内部亮还是孔的下方亮,求大神解答

求大神分析DNA电泳胶图


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立林258369

铁杆木虫 (著名写手)

★ ★
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2019-06-06 07:48:59
感觉是DNA纯度不是很高,可以用分光光度计测定一下,400的浓度算很高了,是提取鲍曼不动杆菌吧

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爱拼才会赢
2楼2019-03-17 16:31:09
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zouyina

银虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by 立林258369 at 2019-03-17 16:31:09
感觉是DNA纯度不是很高,可以用分光光度计测定一下,400的浓度算很高了,是提取鲍曼不动杆菌吧

我测的OD感觉还可以。260/280在1.92左右,260/230在2.41左右。用高纯水溶解的DNA

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3楼2019-03-17 17:30:20
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立林258369

铁杆木虫 (著名写手)

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
渊博震天: 金币+2, 鼓励回帖交流 2019-03-17 21:28:49
感觉还可以,如果只是做普通的pcr ,应该不影响,如果需要高纯度的DNA,可以用磁珠法纯化,或者用乙醇法。                                             乙醇沉淀方法:
1、加入1/4体积量的10M NH4OAC (pH4.5)
2、加入2.5倍体积量的冷无水乙醇,-20度放置30~60分钟
3、离心回收沉淀,用70%的冷乙醇清洗沉淀,真空干燥或生物安全柜中吹干,但是别太干,不然不好溶解

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爱拼才会赢
4楼2019-03-17 19:29:17
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zouyina

银虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by 立林258369 at 2019-03-17 19:29:17
感觉还可以,如果只是做普通的pcr ,应该不影响,如果需要高纯度的DNA,可以用磁珠法纯化,或者用乙醇法。                                             乙醇沉淀方法:
1、加入1/4体积量的10M NH4OAC (pH4.5)
2 ...

只是做个PCR,试试结果吧,谢谢

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5楼2019-03-18 08:58:12
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Mr-春哥

新虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我感觉这个胶跑的没毛病,

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宽容而不懦弱,平凡而不平庸
6楼2019-06-05 20:42:33
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山舞银蛇

铁杆木虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
SDS裂解的时候,加一些蛋白酶K,把基因组DNA结合的蛋白消化一下。
广州湾区生物研发总监
7楼2019-06-10 14:09:24
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