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童剑军

新虫 (初入文坛)

[求助] 菌液PCR与质粒PCR已有2人参与

各位大佬 在下做的是将构建好的质粒转入到大肠杆菌DH5α中扩增  结果就是挑菌摇菌之后 用菌液为模板做PCR结果都没有 但是把该菌液用试剂盒提取质粒之后 用质粒PCR鉴定 有目的条带 大小也正确   让在下疑惑的是 同样的引物 为什么质粒PCR可以正常扩增目的条带 但是菌液PCR却做不出来  请各位大佬 帮忙解释一下 帮在下解惑  万分感谢!

@biostar2009 发自小木虫IOS客户端
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846145444

新虫 (初入文坛)

为什么呢

发自小木虫Android客户端
2楼2019-03-16 22:51:31
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a13515517892

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2019-03-18 21:05:16
同样的引物,同样的操作,如果你菌落pcr没有,质粒pcr有,这个说明你实验有问题,至少是在菌落pcr上是有问题的,
3楼2019-03-18 08:54:04
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elmanbio

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2019-03-18 21:05:28
可以考虑一下你引物的问题了,原因是:质粒PCR可以,你已经去除了蛋白和其他杂质,说明没有问题
你菌液pcr,如果只是单纯的挑个单菌落作为pcr模板,菌液裂解会释放核酸和蛋白,如果你引物设计的恰好和其他质粒外的DNA有一些不良结构,没有结果也是意料中的可能;
建议,如果是菌液pcr,你可以试一下,把菌落煮沸以后,离心取上清做模板,可能有结果
4楼2019-03-18 12:52:12
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buchongyang

铜虫 (初入文坛)

楼主挑菌的时候有没有煮沸呢?

发自小木虫Android客户端
5楼2019-03-20 23:10:42
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