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【调剂】北京石油化工学院2024年16个专业接受调剂
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星星不太萌

新虫 (小有名气)

[求助] 改造载体构建已有3人参与

科研小白,进实验室两个月,导师让我改造一个载体,将一个载体上的基因插入另一个载体上。自己查资料,学姐指导,从找酶切位点,设计引物,酶切回收,连接载体和片段,转化,菌落PCR/F8验证一步一步,最后到用原来的酶再酶切验证的时候,却只切出一条带,两条带的位置也不正确,学姐说是假阳性,我从连接开始重做,反复做了好几遍,改变载体和片段连接的比例,时间,最后酶切验证的结果都是一样的,真的很失落,过年也没回家,就在实验室构建这个载体,结果却不如人意,求各位大神指点,帮帮我吧。

改造载体构建


@wizardfan @wizardfan @biostar2009 @飞约疯人院 @youlinglyw 发自小木虫Android客户端
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rohdy

新虫 (著名写手)


西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2019-02-21 22:42:07
用同源重组法试试

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2楼2019-02-21 19:17:39
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普通回帖

a13515517892

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你过年都不回家啊。建议你先把你手头的载体都测序验证一下, 包括目的基因序列,确保他们是正确的再去做实验
3楼2019-02-22 10:16:47
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星星不太萌

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by a13515517892 at 2019-02-22 10:16:47
你过年都不回家啊。建议你先把你手头的载体都测序验证一下, 包括目的基因序列,确保他们是正确的再去做实验

酶切之后的载体,片段都去测序吗?

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4楼2019-02-22 12:42:50
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星星不太萌

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 星星不太萌 at 2019-02-22 12:42:50
酶切之后的载体,片段都去测序吗?
...

我觉得没问题,跑胶的结果是对的

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5楼2019-02-22 12:43:30
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shuqi123

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你的基因序列对吗?
考虑的到别的因素了吗?之前也有人小白不是很懂 你的问题我可以帮你问问 也许群里大神可以帮到你
实验室小玩家 MY QQ 3150890351
6楼2019-02-22 14:50:37
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zhiyaodh

铁虫 (小有名气)

片段和载体都测一下两端两个反应吧,别连半天片段都不对

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观自在,为守护
7楼2019-02-22 15:26:40
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星星不太萌

新虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by shuqi123 at 2019-02-22 14:50:37
你的基因序列对吗?
考虑的到别的因素了吗?之前也有人小白不是很懂 你的问题我可以帮你问问 也许群里大神可以帮到你

插入片段的基因序列是学姐给我的,没问题。
谢谢你了。

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8楼2019-02-24 19:50:36
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匿名

用户注销 (正式写手)

本帖仅楼主可见
9楼2019-02-26 22:18:25
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星星不太萌

新虫 (小有名气)

嗯嗯,我每次转化之后涂板的数量也不是很多

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10楼2019-02-27 07:59:22
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