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tp20071352银虫 (正式写手)
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各位老师，帮帮啊，提的rna跑胶总是降解，求救？已有2人参与
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细胞rna提取出来nanodrop测OD大概在1.95左右，浓度500-1200ng/ul一定范围，半个月了提了很多回了，离心管、移液枪，tips头等全都用depc泡了灭菌的，超净台里提，步骤如下： 1)每1ml液体中加入1/5体积（约200μl）的氯仿，盖紧EP管，用手剧烈震荡15秒，直至溶液充分乳化，无分相现象。 2)室温静置5 min，4℃，12000rpm离心15 min。 3)从离心机中小心取出EP管，此时匀浆液分为三层，上层是透明的水层，RNA溶解在此层中；半固体状的中间层，此层中包含DNA；下层为粉红色的有机溶剂，蛋白质、多糖等物质溶解在此层中。 4)将上层水相溶液小心转移至新的EP管中，大约每个EP管中能取出400~500μl，谨慎操作，切勿吸到中间层。 5)加入等体积异丙醇，上下颠倒EP管，充分混匀。 6)室温静置10 min后，4℃，12000rpm离心10 min。可在离心后的EP管底部观察到少量的白色沉淀。 7)小心弃去上清。 8)向含有沉淀的EP管中缓缓加入1ml预冷75%乙醇，轻轻上下颠倒，清洗沉淀。 9) 4℃，12000rpm离心5 min 10)用移液器除去上清。 11)将EP管瞬时离心，用移液器仔细将残存在EP管底部的少量液体除去。 12)打开EP管，室温放置干燥（2-5min）。 13)用20ul depc水溶解沉淀。 电泳是1%凝胶，100v 12min。  rna.jpg |
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tp20071352
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2楼2019-01-15 17:22:01
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11楼2019-01-17 11:19:21
药大C斌
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2019-04-22 22:37:16
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od值在1.95纯度不是很好吗？是不是跑胶的时候降解掉了，跑胶的电泳液是用depc水配的吗？ 发自小木虫Android客户端 |
3楼2019-01-15 17:25:42
tp20071352
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4楼2019-01-15 17:28:40
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5楼2019-01-15 17:31:30
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6楼2019-01-15 17:33:34
tp20071352
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7楼2019-01-15 17:38:13
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8楼2019-01-15 20:14:57
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10楼2019-01-17 11:18:35
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