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【调剂】北京石油化工学院2024年16个专业接受调剂
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团团瑞瑞

新虫 (初入文坛)

[求助] SYBR Green qPCR扩增,溶解曲线校正后出现异常峰已有1人参与

实验目的:定量检测人某癌基因的表达
样本:人某癌细胞cDNA,基因:GADPH,试剂:SYBR Green qPCR mix+High ROX,仪器:ABI step one。
(注:用ABI step one定量检测基因表达时,需要加High ROX校正)
问题描述:做定量PCR实验,结果分析时,不进行ROX校正时,溶解曲线正常(图1),进行ROX校正后,溶解曲线前端出现杂峰(图2)。
校正前后,扩增曲线均正常(图3,图4),ROX扩增曲线正常(图5)。
请问各位虫友,溶解曲线异常有可能是什么原因导致的呢?

SYBR Green qPCR扩增,溶解曲线校正后出现异常峰
1. 校正前,溶解曲线正常.jpg


SYBR Green qPCR扩增,溶解曲线校正后出现异常峰-1
2 校正后,溶解曲线前端有杂峰.jpg


SYBR Green qPCR扩增,溶解曲线校正后出现异常峰-2
3 校正前扩增曲线.jpg


SYBR Green qPCR扩增,溶解曲线校正后出现异常峰-3
4 校正后扩增曲线.jpg


SYBR Green qPCR扩增,溶解曲线校正后出现异常峰-4
5 ROX扩增曲线.jpg
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美亿美生物

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技术服务-实验代做


2楼2018-11-05 15:13:15
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耶耶?

新虫 (初入文坛)

楼主解决了吗,我也遇到这种情况

发自小木虫Android客户端
3楼2019-09-06 13:19:32
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macgray1

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

你没发现你的两个纵坐标的值不一样吗
4楼2019-09-06 16:52:14
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1083

新虫 (初入文坛)

朋友 这个问题 我也遇到了 你怎么解决的
5楼2020-06-13 22:24:41
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Word麻鸭~

新虫 (小有名气)

老师您好,不知道您这个问题有没有解决,我最近也遇到了这个问题

发自小木虫Android客户端
6楼2022-06-24 20:53:37
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skull123

木虫 (正式写手)

有没有可能,前面的那个峰是引物二聚体?
7楼2022-06-25 16:53:19
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766482434

禁言 (初入文坛)

本帖内容被屏蔽

8楼2022-08-22 16:42:48
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