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荧光定量PCR扩增曲线异常已有1人参与
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做荧光定量PCR的时候，发现阴性对照和标本的曲线都是斜向上的，是什么原因呢？我用的PCR仪是ABI 7500，试剂盒是Takara的One Step PrimeScript™ RT-PCR Kit (Perfect Real Time)，反应体系参考试剂盒说明书，RT-PCR buffer 10μL,Takara EX Taq HS 0.4 μL,PrimeScript RT encyme Mix 0.4 μL,上游引物 0.4 μL,下游引物 0.4 μL,探针 0.8 μL,ROX Reference Dye II 0.4 μL,RNase Free dH2O 5.2 μL,RNA 2 μL。反应过程：45℃ 30 min；95℃ 10 sec；95℃ 5 sec；54℃ 34 sec（40个循环）。Passive:ROX。第一张图是阴阳对照和标本的曲线，出现明显扩增的深蓝色曲线是阳性对照，标本和阴性对照的曲线都是斜向上的，第二张图是标本和阴性对照曲线的放大。请问是哪个地方有问题？具体要怎么改正？麻烦说的详细一些，非常感谢！ 标本加阴阳对照.jpg   标本加阴性对照.jpg |
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