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dentist-L

新虫 (初入文坛)

[交流] 关于平板菌落计数的问题!求各位大神帮助我!已有4人参与

小生是口腔医学专业的学生,生平第一次接触微生物培养和抗菌实验,烦请各位大神多多指点。
具体情况是这样:我老板自己研发了一种材料,要检测材料的抗菌性能。 我自己的实验设计是,复苏,增菌后,用灭菌纯水配OD595=0.1菌悬液。实验组分四组:①5ml肉汤培养基+200ul菌悬液 (空白组) ②5ml肉汤培养基+1ml材料一+200ul菌悬液  ③5ml肉汤培养基+1ml材料二+200ul菌悬液 ④5ml肉汤培养基+材料三+200ul菌悬液。不同材料的浓度均匀1mg/ml,培养24h后,每组取样进行浓度梯度稀释,稀释到10~6或10~7或10~8次方,然后取100微升涂布在平板上,培养数小时后进行平板菌落计数。

请问各位,此实验设计合理吗?有没有什么缺漏的地方求各位指教。平板菌落计数法实施时需要注意什么细节吗?
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xiecj

木虫 (著名写手)

你需要在空白组加入1mL,配置材料用的溶液

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3楼2018-08-21 15:01:10
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xiecj

木虫 (著名写手)


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不合理,你总的体积不一样,相当于初始细菌密度不同

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2楼2018-08-21 15:00:09
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dentist-L

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by xiecj at 2018-08-21 15:01:10
你需要在空白组加入1mL,配置材料用的溶液

谢谢指点,我会照做的。

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4楼2018-08-21 20:35:57
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snoopytbw

荣誉版主 (著名写手)


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稀释一般都是原液开始的,这个不太对吧

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5楼2018-08-22 07:50:20
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dentist-L

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by snoopytbw at 2018-08-22 07:50:20
稀释一般都是原液开始的,这个不太对吧

什么是从原液开始呢?您的意思是先稀释然后再添加材料培养,然后再计数吗?

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6楼2018-08-22 11:29:24
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snoopytbw

荣誉版主 (著名写手)


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引用回帖:
6楼: Originally posted by dentist-L at 2018-08-22 11:29:24
什么是从原液开始呢?您的意思是先稀释然后再添加材料培养,然后再计数吗?
...

抑菌浓度梯度啊,为什么是10~6或10~7或10~8次方呢?不合理啊,选择依据是什么
7楼2018-08-22 14:33:38
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dentist-L

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
7楼: Originally posted by snoopytbw at 2018-08-22 14:33:38
抑菌浓度梯度啊,为什么是10~6或10~7或10~8次方呢?不合理啊,选择依据是什么...

因为我不知道稀释到多少倍后、涂布在平板上培养一个周期才可以在肉眼下方便计数,要有一个探索过程。也就相当于我要做一个预实验,来确定我具体稀释到哪个度。金葡菌我是稀释到了负六就可以计数了,但绿脓杆菌我稀释到负七也没办法计数。所以我就说了10~6或10~7或10~8次方。

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8楼2018-08-22 15:16:02
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nicolas_w

新虫 (小有名气)


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抑菌、你可以参照国标15979,测产品抑菌率、活着你可以先做一下你的材料是否有抑菌性(做抑菌圈实验)

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9楼2018-08-22 16:28:24
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dentist-L

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
9楼: Originally posted by nicolas_w at 2018-08-22 16:28:24
抑菌、你可以参照国标15979,测产品抑菌率、活着你可以先做一下你的材料是否有抑菌性(做抑菌圈实验)

好的,谢谢你

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10楼2018-08-22 16:52:51
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