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chenpp2006

新虫 (正式写手)

引用回帖:
8楼: Originally posted by Agonilb at 2018-08-15 12:08:55
第一轮从来没有看到过条带,我是做两次PCR,用的同一个引物,只是第二次用的模板是第一次的产物。能出来条带,就是菌检不行。
...

刚上手开始做新试验,一定要严格按照protocol来。等你熟练了,才可以用自己的一些小技巧。

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11楼2018-08-15 19:51:40
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nigga4life

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by chenpp2006 at 2018-08-15 03:57:21
都不需要试剂盒的。3R比较容易,反转录引物和通用引物都能查到,常规操作就Ok。在常规反转录cDNA的5'端加多个G或C,相当于加了adaptor,可以直接用于5R扩增。都不用试剂盒的。你自己多找几篇文献看看,中文的就有几 ...

不是很懂,还请再指教
12楼2018-08-15 20:35:39
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chenpp2006

新虫 (正式写手)

引用回帖:
12楼: Originally posted by nigga4life at 2018-08-15 20:35:39
不是很懂,还请再指教...

自己去找文献看看

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13楼2018-08-16 00:45:21
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Agonilb

新虫 (小有名气)

嗯嗯,知道了,谢谢你,非常感谢

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14楼2018-08-16 08:01:15
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Agonilb

新虫 (小有名气)

引用回帖:
11楼: Originally posted by chenpp2006 at 2018-08-15 19:51:40
刚上手开始做新试验,一定要严格按照protocol来。等你熟练了,才可以用自己的一些小技巧。
...

嗯嗯,知道了,谢谢你

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15楼2018-08-16 08:02:45
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谦虚求解

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
10楼: Originally posted by chenpp2006 at 2018-08-15 19:48:44
第二轮最好不要用同样的引物,很容易出现非特异扩增。而且两轮用同样的引物就不能叫做巢式PCR了
...

你好,我目前也打算做3‘RACE,但是头一次,实在是不知道需要什么?求指教
16楼2018-08-29 11:03:39
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chenpp2006

新虫 (正式写手)

引用回帖:
16楼: Originally posted by 谦虚求解 at 2018-08-29 11:03:39
你好,我目前也打算做3‘RACE,但是头一次,实在是不知道需要什么?求指教...

首先要明白实验原理,然后要理解实验步骤,接着要熟悉操作,最后祝自己好运。

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17楼2018-08-29 11:24:28
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elmanbio

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

扩增未知序列不一定非要race,你看看genewalking
比较简单的是用TAIL-PCR扩增未知序列就可以,如果想进一步交流,可以QQ联系2488328082,备注小木虫,什么问题
18楼2018-08-29 13:18:49
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谦虚求解

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
18楼: Originally posted by elmanbio at 2018-08-29 13:18:49
扩增未知序列不一定非要race,你看看genewalking
比较简单的是用TAIL-PCR扩增未知序列就可以,如果想进一步交流,可以QQ联系2488328082,备注小木虫,什么问题

好的,谢谢

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19楼2018-08-29 16:37:44
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xfhysss-314

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by chenpp2006 at 2018-08-15 03:57:21
都不需要试剂盒的。3R比较容易,反转录引物和通用引物都能查到,常规操作就Ok。在常规反转录cDNA的5'端加多个G或C,相当于加了adaptor,可以直接用于5R扩增。都不用试剂盒的。你自己多找几篇文献看看,中文的就有几 ...

同样的疑惑,能否具体说一下操作,反应体系,反应条件?
20楼2018-09-01 09:33:20
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