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厚德求是

木虫 (著名写手)


[交流] 如何使用小分子标签在不融合多肽片段的情况下标记蛋白质分子

想和虫友们交流一下蛋白质标记的问题。蛋白质标记嘛,顾名思义,通过给蛋白质加一个标签来显示目标蛋白质的表达,结构和功能特性,常用的标签是荧光标记。

简单的说,我想要给我感兴趣的蛋白质加一个荧光标签,这样我就可以观察这个蛋白质在细胞内的表达和分解情况。我知道目前常用的标签有荧光蛋白融合表达和抗体免疫反应法,然而这个两个方法我都不喜欢。

首先荧光蛋白融合表达我没法用。GFP和它的variants都太大了,有30kDa上下,我的目标蛋白在细胞内是有特定功能的,拖着这么个大家伙,其功能必受影响。并且,在末端加多肽片段会影响我目标蛋白质的稳定性,让它表现不自然。因此排除这个方法。

第二个方法嘛,比较依赖抗体,抗原/一扛的特异性很难保证。另外就是抗原在细胞体内,一/二抗是大分子蛋白质,他们进入细胞的前提是给细胞做穿透,这个穿透的效率是难以保证的。不可控因素较多,我不喜欢这个方法。

所以我想要问的是,有没有虫友做的课题里面涉及到了小分子label蛋白质的方法,如果有的话请您描述一下。我找到的小分子label要么是特异性都不好,识别多种相近短肽片段。要么就是含有特异性结构的蛋白质识别片段过长。如何才能让小分子label在不添加peptide tag的情况下直接识别我的目标蛋白本身呢?

研究遇到了问题,我猜想自己可能入陷入了自相矛盾的循环之中。因此,我希望看到帖子的您能帮我思考一下这个问题。
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liyushan_1

新虫 (文坛精英)



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4楼2018-08-11 02:24:39
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假大空

木虫之王 (文学泰斗)



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好运
8楼2018-08-11 07:20:00
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liuqiang68

至尊木虫 (文坛精英)



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13楼2018-08-11 07:37:50
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liuqiang68

至尊木虫 (文坛精英)


加油!
14楼2018-08-11 07:38:06
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28楼2018-08-11 09:29:43
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fdvqxu17

禁虫 (正式写手)


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31楼2018-08-11 09:53:17
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zuiaixuexi

至尊木虫 (文坛精英)



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祝你成功
32楼2018-08-11 10:07:28
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厚德求是

木虫 (著名写手)


41楼2018-08-11 11:45:56
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v64112084

金虫 (正式写手)



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47楼2018-08-11 12:48:22
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syhorchid2楼
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xhmaohan3楼
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鸵辟re99楼
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非谌ws715楼
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