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【调剂】北京石油化工学院2024年16个专业接受调剂
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乳糖操纵子

新虫 (初入文坛)

[求助] 有关PCR的问题求助已有3人参与

急需PCR大神的帮助,刚刚开始PCR设计了一段简并引物,我的目的条带大小是1500bp左右,可是P出来只有500bp,而且条带也很弱,在100bp那里还有比较粗的条带,但是不是很亮,是不是引物二聚体呢?不知道是什么原因,希望虫友能指点一二,不胜感激。

有关PCR的问题求助
微信图片_20180731215545.jpg
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nigga4life

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

100bp左右那条很大可能是二聚体了
2楼2018-08-16 15:25:12
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xmcsxq0606

新虫 (正式写手)

3楼2018-08-29 22:20:42
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KM石头

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2018-08-31 08:19:38
提高退火温度或降低引物浓度,可改善,如果还不行,只能重新设计引物
4楼2018-08-30 20:56:35
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兜转十年

禁虫 (初入文坛)

本帖内容被屏蔽

5楼2018-08-31 10:39:39
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琳琳blue

新虫 (小有名气)

6楼2018-11-18 21:53:37
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琳琳blue

新虫 (小有名气)

7楼2018-12-11 18:02:21
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dreamhust

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

100bp左右的是引物二聚体,500bp处有条带说明你的引物特异性不够好,有没有用NCBI primer blast确认你的引物对特异性?提高Tm值试一下如果仍然扩增不出来可能需要重新设计引物了。
8楼2018-12-11 18:35:39
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我最爱的雪维

新虫 (小有名气)

引物没问题的话就是条件合理性问题了,比如GC含量与退火温度,延伸时间,额外体系等

发自小木虫Android客户端
9楼2018-12-26 09:26:40
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_Mario

新虫 (小有名气)

一般退火温度设置为50的时候就能跑出目的条带,如果出不来可能就是引物的关系,当然,也有可能是模板浓度过高了,与引物浓度比例不匹配,你可以先将其做个梯度稀释一下。

发自小木虫Android客户端
10楼2019-08-11 18:57:52
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