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【调剂】北京石油化工学院2024年16个专业接受调剂
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xmxlt

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助做抗体,做过免疫亲和层析的大佬!已有2人参与

本人刚接触蛋白纯化,利用免疫亲和层析法从植物中提取一种天然蛋白,前期利用原核表达系统表达出我目的蛋白的重组蛋白去打抗体,抗体纯化后偶联填料做亲和柱,我做了ELISA检测, 抗体效价达到512k,可是样品过柱后洗脱液没有把蛋白洗下来(胶的最右泳道是流穿液,右2是洗脱未结合蛋白的第一管),想请问各位大神这是因为我的蛋白没有结合上吗??样品是否需要挂柱过夜?  谢谢各位了!!~~

求助做抗体,做过免疫亲和层析的大佬!
20180730免疫亲和层析-pre-1.jpg
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七星桥缘

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
目的蛋白分子量多大?原样和流穿对比,目的条带是否变少,变少说明结合上没洗脱下来;条带没变化说明没结合。
2楼2018-08-02 10:11:13
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wbgaoshou

禁虫 (初入文坛)

★ ★ ★ ★ ★
xmxlt: 金币+5, 有帮助 2018-09-06 10:45:17
本帖内容被屏蔽

3楼2018-08-08 16:15:18
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xmxlt

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by wbgaoshou at 2018-08-08 16:15:18
你的抗体纯度不够,这是最主要原因,在抗体偶联是目标抗体成功偶联的比例太低,可以qq,87083259

抗体是我师兄用剩余的,在16年做过纯化,之后保存在-20度,请问抗体亲和柱在4度能保存多久?
4楼2018-08-09 20:00:41
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prthefu

木虫 (著名写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by xmxlt at 2018-08-09 20:00:41
抗体是我师兄用剩余的,在16年做过纯化,之后保存在-20度,请问抗体亲和柱在4度能保存多久?...

一般用20%乙醇做储存液,放在四度都是没问题的。按照你说的,放上两年,感觉应该问题不大
nothing is impossible in this world,if you have the will to win,you can achieve anything
5楼2018-12-24 18:04:09
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