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【调剂】北京石油化工学院2024年16个专业接受调剂
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liangfeng76

新虫 (初入文坛)

[交流] 基因敲除已有3人参与

急求。最近在做大肠杆菌基因敲除，方法Red同源重组。现在已将cat片段转入，用PCR鉴定是否敲除成功时遇到极为棘手的问题。我将冻存菌分区划线在Cm+(34mg/mL)LB 平板上，待菌落长出后再进行分隔划线。长出后PCR鉴定1-16号（上下游引物距离氯霉素片段均为300bp），利用野生菌MC作为对照。但是P出来结果如下，已经连续纯化两次，不明白为何如此。麻烦各位大神解析下，谢谢了~

基因敲除
IMG_3679.JPG
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1楼2018-07-04 14:42:17
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静晖淡

新虫 (初入文坛)
★
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这是内外侧引物鉴定的结果吗

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2楼2018-07-31 17:46:21
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柚子ttt

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
这个胶跑的真干净啊

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3楼2018-09-30 21:40:18
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liangfeng76

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 静晖淡 at 2018-07-31 17:46:21
这是内外侧引物鉴定的结果吗

真是不好意思 我刚看到、、对的呢 这是内外侧鉴定引物的结果 、出现了目的片段和打靶片段同时存在的情况
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4楼2018-11-22 00:11:16
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加油lxz

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
楼主你好，我也是存在目的片段和打靶片段同时存在的情况，并且还有其他杂带出现，请问楼主的问题解决了吗？求赐教。

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5楼2019-03-19 08:39:16
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加油lxz

新虫 (小有名气)
基因敲除-1

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6楼2019-03-19 08:40:25
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