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西大慢慢

铁虫 (正式写手)


[交流] 菌定量和定性检测,为什么加水也能扩出来

我最近在做菌的定植和母体传播,实验是这样的给小鼠灌喂一种特异菌,然后一定时间后检测该菌在肠道的定植情况和在胎盘中的定植情况。在采用荧光定量和普通PCR检测,结果发现普通定量中,空白阴性对照(加dd水,就是PCR时不加入DNA,加去离子灭菌水)也发现有条带,荧光定量是也检测出了循环值,而且低于灌喂该种菌的小鼠中的循环值。希望大神能给点意见,为什么pcr中不加入DNA也扩增出来了该条带,引物的特异性,退火温度都检测过了,没问题,特异性都很好。望大神解答,谢谢了!

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西大慢慢

铁虫 (正式写手)


★ ★ ★
snoopytbw: 金币+3, 鼓励交流 2018-11-10 15:39:32
水要换成分子级的无菌水,水中可能存在这种菌,至于动物中可能是由于引物特异性的问题。水中扩增是由于水被污染了的问题,还有就是尽量在超净台去做,因为空气也有某些菌,避免污染。

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178楼2018-11-07 14:51:05
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西大慢慢

铁虫 (正式写手)


你在超净台里试试,点上酒精灯。然后每一步都尽量避免污染,水去买那种试剂公司的,你给他说你要分子级别的,以前我自己灭菌的miniq的水也有条带

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180楼2018-11-08 15:19:31
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假大空

木虫之王 (文学泰斗)



西大慢慢(金币+3): 谢谢参与
好运
13楼2018-06-22 08:18:11
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biosci

捐助贵宾 (著名写手)



西大慢慢(金币+3): 谢谢参与
操作污染了吧

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24楼2018-06-22 08:32:22
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2018-06-22 07:58   回复  
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gcdrhh153楼
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uhrpqbk864楼
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phjbj4728楼
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