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【调剂】北京石油化工学院2024年16个专业接受调剂
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Aurora7799

新虫 (初入文坛)

[交流] 有前辈是做真菌和细菌原生质体这块的吗?已有4人参与

第一次做开放性实验项目，选了做原生质体这块的，刚开始就有问题了，在显微镜下看不到原生质体出来，不知道是哪里有问题，我是先用菌丝培养液培养黑曲霉24h，然后用溶菌酶和蜗牛酶混合液按1:1的比例在30℃水浴中进行酶解的，有前辈可以指出一下我哪里有问题吗，救救孩子吧，拜托了(?_?)

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1楼2018-06-14 17:37:30
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三叶虫122

铁虫 (初入文坛)
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提高缓冲液浓度，延长破壁时间，更换新酶。
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3楼2018-06-16 11:34:18
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三叶虫122

铁虫 (初入文坛)
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我们原来三个小时都没出来，放一晚上出来了，全是很圆的细胞，像屏保肥皂泡。但前提的酶必须给力。菌丝必须是嫩的，菌长老了，你就别想了，还得有菌量，菌太少，也别想了。菌量大了，酶不仅新鲜还得跟上量，不然也出不来。缓冲液浓度太低，细胞都碎了，也看不到。希望能帮到你。
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4楼2018-06-16 11:42:20
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biosci

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酶不行，溶菌酶是处理细菌的，蜗牛酶活力太低，建议直接去买溶壁酶

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2楼2018-06-15 13:00:26
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Aurora7799

新虫 (初入文坛)
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4楼: Originally posted by 三叶虫122 at 2018-06-16 11:42:20
我们原来三个小时都没出来，放一晚上出来了，全是很圆的细胞，像屏保肥皂泡。但前提的酶必须给力。菌丝必须是嫩的，菌长老了，你就别想了，还得有菌量，菌太少，也别想了。菌量大了，酶不仅新鲜还得跟上量，不然也出 ...

是直接在光学显微镜下看到的，还是在差相显微镜下看到的呢?

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5楼2018-06-22 10:17:33
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Aurora7799

新虫 (初入文坛)
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3楼: Originally posted by 三叶虫122 at 2018-06-16 11:34:18
提高缓冲液浓度，延长破壁时间，更换新酶。

加大酶量也不可以吗?

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6楼2018-06-22 10:18:31
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Aurora7799

新虫 (初入文坛)
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4楼: Originally posted by 三叶虫122 at 2018-06-16 11:42:20
我们原来三个小时都没出来，放一晚上出来了，全是很圆的细胞，像屏保肥皂泡。但前提的酶必须给力。菌丝必须是嫩的，菌长老了，你就别想了，还得有菌量，菌太少，也别想了。菌量大了，酶不仅新鲜还得跟上量，不然也出 ...

还有菌丝大概要培养多长时间呢，我们培养的时间是在24h左右，菌丝都缠绕在了一起，离心的时候，离不下来
有前辈是做真菌和细菌原生质体这块的吗?



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7楼2018-06-22 10:29:11
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Aurora7799

新虫 (初入文坛)
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2楼: Originally posted by biosci at 2018-06-15 13:00:26
酶不行，溶菌酶是处理细菌的，蜗牛酶活力太低，建议直接去买溶壁酶

谢谢，准备尝试

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8楼2018-06-22 10:30:05
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三叶虫122

铁虫 (初入文坛)
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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5楼: Originally posted by Aurora7799 at 2018-06-22 10:17:33
是直接在光学显微镜下看到的，还是在差相显微镜下看到的呢?
...

光学显微镜下，真菌的原生质体很大很容易看
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9楼2018-06-24 21:35:31
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三叶虫122

铁虫 (初入文坛)
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6楼: Originally posted by Aurora7799 at 2018-06-22 10:18:31
加大酶量也不可以吗?
...

酶失活了，你加多大也没用，
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10楼2018-06-24 21:36:20
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