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yuruj

金虫 (小有名气)

[求助] 透明质酸酶抑制实验——请问有人成功完成透明质酸酶的抑制实验吗?求指点关键步骤!已有3人参与

各位虫友,请问有人成功完成透明质酸酶的抑制实验吗?求指点关键步骤!
本人用的是以下方法:取0. 1mLCaCl2 溶液( 0. 25mmol/ L) 和0. 5mL 透明质酸酶液37℃ 保温培养20min; 加入样品液0. 5mL,37℃ 保温培养20min; 加入0. 5mL透明质酸钠液37℃􀀁 保温30min, 常温放置5min; 加入0. 1mLN aOH 溶液( 0. 4mol/ L) 和0. 5mL乙酰丙酮溶液, 置于沸水浴中加热15min 后立即冷却5min;
加入埃尔利希试剂1. 0mL 并用3. 0mL 无水乙醇进行稀释,放置20min 显色, 测定吸光度。                                                                                                               透明质酸酶抑制率( %) =( A- B) - ( C- D)/(A- B)* 100% (
式中: A 为对照溶液ABS 值( 用醋酸缓冲溶液代替样品溶液) ; B 为对照空白溶液ABS 值( 用醋酸缓冲溶液代替样品溶液及酶液) ; C 为试样溶液A BS 值; D 为试样空白溶液ABS 值( 用醋酸缓冲溶液代替酶液) 。
最终结果是A、B、C、D吸光值均很低,相差不大。
我在考虑是否该反应未发生?
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自由的风gaga

铁虫 (初入文坛)

每次加试液后混匀了没??充分混匀。。。  再就是看看管子洗干净了没
2楼2018-06-11 10:09:35
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yuruj

金虫 (小有名气)

混匀了,请问你做这个反应,吸光度能达到多少呢?

发自小木虫IOS客户端
3楼2018-06-11 12:55:36
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自由的风gaga

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
引用回帖:
3楼: Originally posted by yuruj at 2018-06-11 12:55:36
混匀了,请问你做这个反应,吸光度能达到多少呢?

我现在是用CTAB来做透明质酸酶抑制的,直接上的酶标仪,拿到数据直接套公式就得出抑制率了,现在问我吸光度我也不清楚。
你用的DMAB法在乙酰丙酮溶液, 置于沸水浴中加热15min,把水浴时间增加到30~60min试试。你的有些试剂浓度跟我用的不太一样,不过应该问题不大。
建议你可以用甘草酸二钾做个阳性对照再试试

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4楼2018-06-11 14:20:18
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yuruj

金虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by 自由的风gaga at 2018-06-11 14:20:18
我现在是用CTAB来做透明质酸酶抑制的,直接上的酶标仪,拿到数据直接套公式就得出抑制率了,现在问我吸光度我也不清楚。
你用的DMAB法在乙酰丙酮溶液, 置于沸水浴中加热15min,把水浴时间增加到30~60min试试。你的 ...

好的,谢谢!我试试。以后请多多指教!

发自小木虫IOS客户端
5楼2018-06-11 15:33:21
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自由的风gaga

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by yuruj at 2018-06-11 15:33:21
好的,谢谢!我试试。以后请多多指教!
...

你是做化妆品行业的吧??
6楼2018-06-11 16:31:36
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yuruj

金虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 自由的风gaga at 2018-06-11 16:31:36
你是做化妆品行业的吧??...

是的

发自小木虫IOS客户端
7楼2018-06-11 18:45:31
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自由的风gaga

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
7楼: Originally posted by yuruj at 2018-06-11 18:45:31
是的
...

很巧啊,我也是。以后多多交流哈
8楼2018-06-12 08:44:01
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yuruj

金虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by 自由的风gaga at 2018-06-12 08:44:01
很巧啊,我也是。以后多多交流哈...

好的
9楼2018-06-12 11:53:27
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yuruj

金虫 (小有名气)

引用回帖:
9楼: Originally posted by yuruj at 2018-06-12 11:53:27
好的...

对了,我给你发了站内短消息,想了解一下CTAB法,据我查阅文献,发现CATB法只能测透明质酸(透明质酸钠)的含量,你是如何用来测透明质酸酶的抑制率呢?
10楼2018-06-12 12:00:38
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