| 查看: 7346 | 回复: 16 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[交流]
【求助】连接转化大肠杆菌，菌落PCR跑不出条带已有4人参与
|
|||
|
新人诚恳求教： 我拿三条质粒用双酶切分别切开得到一个载体和两个目的片段构建两种重组质粒。 双酶切产物切胶回收电泳图如下： 从右往左分别是marker（10kb），71（取较下方目的片段），72（取上方载体片段），73（取下方目的片段） 这些质粒的大小分别是：71：11.8kb（目的片段2.6kb），72：10.5kb(载体片段9.2kb)，73：11.8kb（目的片段2.6kb） 但是切胶回收后分别以72作为载体和71，73的片段连接构成两个重组质粒并且转化到大肠杆菌却一直失败。 一开始我认为是insert和vector的量不够（起初做的是25ng的载体，10ul连接体系），转化出的大肠杆菌一个板子只有不到20个菌落，挑单克隆做菌落PCR也看不到条带。后来又重新建立连接体系，载体量加到50ng，按照1：3的比例调整后涂板，其中一个板子上长满了菌，另一个还是很少（30多个菌落）。 我又分别挑了24个单菌落进行PCR，结果还是阴性。 目前已经通过对照排除了PCR引物的问题和大肠杆菌感受态的问题，连接产物单独拿出来做PCR是可以扩增出来目的条带的，现在就是不明白长满了板子的菌落真的都会是阴性吗？到底问题出在哪里呢？求高手帮忙指点！  双酶切.png |
回复此楼» 猜你喜欢
武汉轻工大学2024年化环学院机械力化学课题组硕士招生
已经有0人回复
-
负载率计算
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有149人回复
-
球磨纳米粒子条件
已经有6人回复
-
球磨分散剂
已经有4人回复
-
阴阳离子交换剂！！！！
已经有3人回复
-
二苄基磷酰氯，磷酸接酚羟基，
已经有8人回复
-
二苄基磷酰氯，磷酰氯
已经有6人回复
微笑静淌
新虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 548.2
- 散金: 50
- 帖子: 240
- 在线: 154.5小时
- 虫号: 4426775
- 注册: 2016-02-23
- 专业: 动物生理及行为学
7楼2018-06-07 23:37:02
微笑静淌
新虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 548.2
- 散金: 50
- 帖子: 240
- 在线: 154.5小时
- 虫号: 4426775
- 注册: 2016-02-23
- 专业: 动物生理及行为学
2楼2018-06-07 22:49:20
渊博震天
版主 (职业作家)
Yeast Display
- MolEPI: 7
- 应助: 212 (大学生)
- 贵宾: 0.043
- 金币: 21767.4
- 散金: 257
- 红花: 55
- 沙发: 1
- 帖子: 4532
- 在线: 688.4小时
- 虫号: 2380836
- 注册: 2013-03-27
- 性别: GG
- 专业: 抗体工程学
- 管辖: 分子生物
3楼2018-06-07 22:50:08
微笑静淌
新虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 548.2
- 散金: 50
- 帖子: 240
- 在线: 154.5小时
- 虫号: 4426775
- 注册: 2016-02-23
- 专业: 动物生理及行为学
4楼2018-06-07 23:02:09
10
