24小时热门版块排行榜    

【调剂】北京石油化工学院2024年16个专业接受调剂
查看: 2501  |  回复: 8
【有奖交流】积极回复本帖子,参与交流,就有机会分得作者 无金易主 的 10 个金币

无金易主

新虫 (小有名气)

[交流] 关于CRISPR Cas9同源重组敲除基因验证p出来两条带

关于CRISPR Cas9同源重组敲除大肠杆菌BL21基因验证p出来两条带,一条野生型大小条带,一条同源臂大小条带,请问大家做Red同源重组敲除或者crispr类似敲除基因的时候遇见过这个情况吗?你们都是怎么解决的呢,求好人指点

发自小木虫IOS客户端
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

soarrow

铁杆木虫 (正式写手)

酱油歪楼党

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2018-05-21 07:57:23
估计就是重组和未重组混杂一起了
那就筛克隆好了,用单克隆一个个来做PCR鉴定,肯定能够挑出来
2楼2018-05-20 03:03:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

无金易主

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by soarrow at 2018-05-20 03:03:09
估计就是重组和未重组混杂一起了
那就筛克隆好了,用单克隆一个个来做PCR鉴定,肯定能够挑出来

挑的单菌落,确定没杂菌

发自小木虫IOS客户端
3楼2018-05-20 22:25:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

soarrow

铁杆木虫 (正式写手)

酱油歪楼党


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
那就奇怪了。重组片段你是用质粒还是线性DNA?
如果是质粒的话,有没有可能是没有发生重组,而质粒存在于菌体,所以扩增时候有两条带!?
可以考虑换对引物,用比同源臂上下游范围更大一点的位置,确认有没有真正重组发生。
4楼2018-05-22 01:11:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

无金易主

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by soarrow at 2018-05-22 01:11:21
那就奇怪了。重组片段你是用质粒还是线性DNA?
如果是质粒的话,有没有可能是没有发生重组,而质粒存在于菌体,所以扩增时候有两条带!?
可以考虑换对引物,用比同源臂上下游范围更大一点的位置,确认有没有真正 ...

线形DNA,已经打算重新电转了

发自小木虫IOS客户端
5楼2018-05-25 00:24:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

soarrow

铁杆木虫 (正式写手)

酱油歪楼党


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
5楼: Originally posted by 无金易主 at 2018-05-25 00:24:49
线形DNA,已经打算重新电转了
...

也好,相当于实验的重复验证
6楼2018-05-25 03:22:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

FYH2015

捐助贵宾 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
哥们 敲得咋样了?貌似BL21比K12什么的难敲呀
7楼2020-05-18 19:11:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

HK驱魔者

铁虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
修复模板浓度太高,挑菌的时候沾到了

发自小木虫Android客户端
8楼2020-11-21 16:44:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiatingxue

木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
兄弟,请问这个问题怎么解决了,谢谢
骐骥一跃,不能十步;驽马十驾,功在不舍
9楼2022-07-08 22:03:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 无金易主 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 299求调剂 +8 LChogD 2024-03-27 12/600 2024-03-29 14:58 by fyyybin
[考研] 313求调剂 +10 chestnut. 2024-03-28 12/600 2024-03-29 13:40 by wff_6994928
[考研] 复试求调剂 +4 洋~洋 2024-03-29 4/200 2024-03-29 10:55 by 凭楼听雨
[基金申请] 基金评审的打招呼现象 +27 sddxwyn 2024-03-25 31/1550 2024-03-29 09:35 by eulota
[考研] 调剂 +7 材料化工@ 2024-03-26 9/450 2024-03-28 22:26 by 星空星月
[考研] 327求调剂 +4 曲曲奇 2024-03-28 5/250 2024-03-28 17:46 by LLLOOOLLLPPP
[考研] 315求调剂 +6 Sorappp 2024-03-28 6/300 2024-03-28 16:03 by 2020115552
[考研] 321 纺织 材料与化工(085600)求调剂!!! +12 wyfwyf1207 2024-03-23 14/700 2024-03-28 12:06 by zwenzkj
[考研] 297求调剂 +4 木木马哈哈 2024-03-27 4/200 2024-03-28 11:42 by -迷了路啊路
[考研] 298求调剂 +4 孙大大@ 2024-03-24 4/200 2024-03-28 11:40 by -迷了路啊路
[考研] 环境科学与工程初试303分求调剂 +4 来瓣儿柚子 2024-03-26 4/200 2024-03-28 11:04 by 小雨哥
[考研] 一志愿211 材料专硕 总分322 考数二,有国奖和省奖, 求调剂 +17 薛鲸鲸 2024-03-24 19/950 2024-03-27 23:59 by 路十叁
[考研] 330求调剂 +5 NJFU-LXD 2024-03-26 10/500 2024-03-27 14:28 by 小美啦啦啦啦啦
[论文投稿] with journal administrator 5+3 小飞舟 2024-03-26 4/200 2024-03-27 09:46 by topedit
[考研] 化学工程与技术320求调剂 +7 Wjrjxmt 2024-03-26 8/400 2024-03-27 08:50 by 实验室@
[考研] 09食加 285A区求调剂 211本科 +3 心之漾漾呀 2024-03-26 4/200 2024-03-27 01:47 by 心之漾漾呀
[考研] 335求调剂 +6 云怎么挽留 2024-03-26 7/350 2024-03-26 18:29 by Whisper890
[有机交流] 问问各位大佬,氢化钠拿铁勺称会怎么样 +5 abc75 2024-03-23 5/250 2024-03-26 12:10 by 榴莲千层1y】
[考研] 300求调剂 +9 想向上pao 2024-03-23 14/700 2024-03-26 10:11 by siwuhen
[考研] 317求调剂 +5 SKa02 2024-03-23 7/350 2024-03-25 18:28 by barlinike
信息提示
请填处理意见