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【调剂】北京石油化工学院2024年16个专业接受调剂
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ning_2013

新虫 (初入文坛)

[求助] 菌液蛋白酶活测定已有4人参与

求助各位大神:最近在筛选产蛋白酶的菌株,先做了透明圈法有透明圈的产生,现在在做测菌种发酵液的蛋白酶活,但是不知道为什么,水浴后对照组和样品组显色都很深,吸光度几乎没差别,吸光度在680nm下测的。酶活测试方法就是用GB/T 23527-2009,就是利用酶活分解酪蛋白产生酪氨酸的原理。不知道哪里做的不对啊。求助各位我金币有限,望各位见谅
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睡不醒的小虫

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 2645251764 at 2019-09-05 01:20:48
您好,这个问题解决了吗,我现在也遇到了一摸一样的问题,求助一下,谢谢了。
...

您好,我也遇到了同样的问题,请问解决了吗

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7楼2019-09-20 06:19:19
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普通回帖

why9639

木虫 (正式写手)

维斯特洛大陆守门员

★ ★ ★
snoopytbw: 金币+3, 很有道理 2018-05-12 17:40:24
筛选时有透明全说明产蛋白酶,但是不一定就有很高的酶活。可以试一下把发酵液的蛋白浓缩一下在测酶活

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十有九人堪白眼,百无一用是书生
2楼2018-05-11 16:41:19
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snoopytbw

荣誉版主 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
发酵我不太懂,不过我觉得需要考虑是否包涵体,包涵体会影响酶活性的,如果你的发酵液处理前要离心,我怕是包涵体被你离心去除了,发酵液里面其实只有很少的游离酶,会不会这样呢

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3楼2018-05-12 17:43:26
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ning_2013

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by why9639 at 2018-05-11 16:41:19
筛选时有透明全说明产蛋白酶,但是不一定就有很高的酶活。可以试一下把发酵液的蛋白浓缩一下在测酶活

现在主要的问题是对照和样品吸光度都差不多,显色后颜色深浅也差不多,也就是说我的对照也能在加入福林酚试剂后变蓝,也就是我加入三氯乙酸让他直接终止反应它里面也有酪氨酸和福林试剂反应显色,关键是对照和样品颜色都差不多深浅,真是百思不得其解啊
4楼2018-05-14 08:39:44
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ning_2013

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by snoopytbw at 2018-05-12 17:43:26
发酵我不太懂,不过我觉得需要考虑是否包涵体,包涵体会影响酶活性的,如果你的发酵液处理前要离心,我怕是包涵体被你离心去除了,发酵液里面其实只有很少的游离酶,会不会这样呢
...

我测酶活之前的确是离心了,我看国标上都是这么做的,很多文献也是这么测的,貌似是很简单的一个实验,可是到我这里不行了
5楼2018-05-14 08:41:08
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2645251764

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by ning_2013 at 2018-05-14 08:41:08
我测酶活之前的确是离心了,我看国标上都是这么做的,很多文献也是这么测的,貌似是很简单的一个实验,可是到我这里不行了...

您好,这个问题解决了吗,我现在也遇到了一摸一样的问题,求助一下,谢谢了。

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6楼2019-09-05 01:20:48
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枚的回忆

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

平板有透明圈肯定产胞外蛋白酶,检查你酶活测定方法有没有问题
8楼2019-09-20 17:03:15
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2645251764

新虫 (初入文坛)

9楼2019-09-20 20:18:33
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2645251764

新虫 (初入文坛)

难道测酶活发酵液不用离心吗?我看很多文献都是离心的。

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10楼2019-09-20 20:20:20
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