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[交流]
脂肪酶国标法有关底物和blank及其它探讨
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最近在做脂肪酶国标法，有些问题请教交流下。 1.使用的聚乙烯醇，需要很长的时间溶解，在加热煮沸下搅拌约1小时，再关闭加热继续搅拌1小时，则可得完全溶解溶液，不需要用纱布过滤，PH约6.23 2.缺少酶活稀释范围表，不利于稀释倍数的选择 3.使用了三丁酸甘油酯一起测试，值比橄榄油要高一倍 4.实验测试的blank消耗氢氧化钠大概多少？我测试的只有2.7ml左右，不知对否？ 5.酚酞指示剂法对颜色变化的判断误差较大 6.脂肪酶用对硝基苯酚棕榈酸酯做底物是否更好些，但这样一来酶活的定义就不一样了，能统一么？ |
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snoopytbw: 金币+5, 有价值的总结，鼓励下 2018-04-28 11:16:49
snoopytbw: 金币+5, 有价值的总结，鼓励下 2018-04-28 11:16:49
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又做了2天实验，做些总结及对国标方法的优化。 1.样品与空白之间的碱量之差假如超过国标规定的2ml，所得的酶活结果会小一些。 2.底物溶液可以在室温下放置3天依然可以使用，在表面会有一层油皮，撇去即可，剩下的搅拌后依然可以使用，在用的过程中会有浅黄色的橄榄油油花出现，没有关系，底物都是过量的，不影响最终结果。 3.有文献提到酒精并不能完全终止反应，因此为了更精确一些，反应完毕的时间和滴定的时间也尽量准确的话，误差就会变小，我的做法是每个样品之间反应时间和滴定时间都控制在3分钟，两个人配合操作会更好些。 4.为了更好的反应，样品在反应的时候是在搅拌状态下的，用的水下搅拌器，这应该也能缩小误差。 5.用酚酞法测试结果也很精确，用PH计测试时，电极要灵敏度高，否则不如酚酞法。 |
2楼2018-04-24 10:16:54
3楼2018-04-28 10:15:01
4楼2018-04-28 10:27:46
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重新更换PH电极，使用2%PVA分散剂。 1.样品烧杯里乳白色很明显，用酚酞法会干扰对颜色的判定，样品和空白颜色很难一致，若一致则样品会滴定更多的氢氧化钠，使最终测试结果偏高，要想减小误差，刚开始滴定时往溶液里加定量的水稀释（我自己加了10ml）会好些，用PH计检测PH值会更精确，建议用PH计电位法代替酚酞法测试。 2.2%的PVA在加乙醇时不会出现沉淀，但也因没有沉淀导致乳白色很明显，使用酚酞法滴定误差会比较大，需要加水滴定来减小误差。 3.2%的PVA这次结果相比4%PVA结果要高一些，可做个对比试验，用PH计电位法检测。 下图是电位滴定完毕加的酚酞指示剂后颜色显示图，左边两个是空白，右边两个是样品，从颜色明显可以看出左边的空白颜色要深，样品因为本身乳白色的干扰导致颜色看上了要浅一些，实际上PH值都在10.3上。  IMG_7641.JPG |
5楼2018-05-04 15:10:51
6楼2018-05-04 15:22:55
7楼2021-03-30 21:32:16
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