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gumingjian

木虫 (正式写手)

[求助] PCR跑胶,DNA marker 不清晰,有拖尾,请师兄师姐帮忙看下已有1人参与

配胶是用的2%的琼脂糖,加了6uL的样品,100v电压跑胶,大概跑了1h,可连DNA Marker 都不清晰,还有拖尾, 胶溶解时,反复沸腾了好几次。胶溶解后就立即取出,加入gelred,然后就倒到平板上了。不知道是哪里做错了,请有经验的师兄师姐指点一下啊,多谢啦!

PCR跑胶,DNA marker 不清晰,有拖尾,请师兄师姐帮忙看下
Administrator 2018-04-16 13hr 32min.jpg


PCR跑胶,DNA marker 不清晰,有拖尾,请师兄师姐帮忙看下-1
Administrator 2018-04-17 14hr 49min.jpg@biostar2009@biostar2009@youlinglyw@youlinglyw@wizardfan
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小木虫很好啊
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渊博震天

至尊木虫 (著名写手)

Daryl


drwhoknowss: 金币+1, 鼓励交流 2018-04-17 23:08:09
胶溶解的时候反复沸腾几次后摇晃一下瓶子看看胶是否澄清透明,溶解完后要冷却至不烫手时加入染色剂,轻轻摇晃后倒入胶板

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2楼2018-04-17 21:07:31
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龙腾92

新虫 (小有名气)

3楼2018-04-17 21:25:46
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gumingjian

木虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 龙腾92 at 2018-04-17 21:25:46
跑胶时间太长了

跑胶时间太长了会有影响吗,?以前大胶还跑过2.5小时呢,以前有几次跑胶跑的很清晰,但是相同的条件最近就跑不出来那么清晰的了

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小木虫很好啊
4楼2018-04-17 21:32:38
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gumingjian

木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 渊博震天 at 2018-04-17 21:07:31
胶溶解的时候反复沸腾几次后摇晃一下瓶子看看胶是否澄清透明,溶解完后要冷却至不烫手时加入染色剂,轻轻摇晃后倒入胶板

谢谢,以前确实是等到胶不那么热了,再加入染色剂,不过一摇晃,里面全是泡泡,就想着热一点时加入染色剂,然后时间久一点后泡泡会消失。您觉得这步会影响到拖尾,或者条带不清晰吗?
小木虫很好啊
5楼2018-04-17 21:57:44
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渊博震天

至尊木虫 (著名写手)

Daryl

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gumingjian: 金币+20, ★★★★★最佳答案, 谢谢,我再多试试! 2018-04-19 10:18:54
引用回帖:
5楼: Originally posted by gumingjian at 2018-04-17 21:57:44
谢谢,以前确实是等到胶不那么热了,再加入染色剂,不过一摇晃,里面全是泡泡,就想着热一点时加入染色剂,然后时间久一点后泡泡会消失。您觉得这步会影响到拖尾,或者条带不清晰吗?...

所以摇晃的时候轻一些,摇完之后稍微静置一下再倒就可以了。

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6楼2018-04-17 22:24:23
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无心云朵

铁虫 (初入文坛)

你配置凝胶的时候有没有加TAE呢?

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7楼2018-04-18 08:20:24
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gumingjian

木虫 (正式写手)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 无心云朵 at 2018-04-18 08:20:24
你配置凝胶的时候有没有加TAE呢?

加了TAE,以前有过忘了加的经历,全是长长的拖尾。

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小木虫很好啊
8楼2018-04-18 08:32:36
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无心云朵

铁虫 (初入文坛)

那你更换一下你的电泳缓冲液,可能用久了,效果不太好~

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9楼2018-04-18 09:04:28
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gumingjian

木虫 (正式写手)

引用回帖:
9楼: Originally posted by 无心云朵 at 2018-04-18 09:04:28
那你更换一下你的电泳缓冲液,可能用久了,效果不太好~

谢谢,每隔几天就会换一次,这个问题应该不会太大。

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小木虫很好啊
10楼2018-04-18 10:48:44
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